Principy a strukturní vlastnosti fluorescenční mikroskopie
Fluorescenční mikroskop je použití vysoké světelné účinnosti bodového světelného zdroje prostřednictvím systému barevného filtrování k vyzařování určité vlnové délky světla (jako je ultrafialové 3650 nebo fialově modré 4200) jako excitační světlo, excitace fluorescenčního materiálu uvnitř vzorek vyzařuje řadu různých barev fluorescence a pak se zvětšuje přes objektiv a okuláry pro pozorování. Tímto způsobem, v silném kontrastním pozadí, i když je fluorescence velmi slabá, je snadno identifikovatelná, vysoká citlivost, používá se hlavně pro studium buněčné struktury a funkce a chemického složení. Základní konstrukce fluorescenčního mikroskopu se skládá z běžného optického mikroskopu a některého příslušenství (jako je zdroj fluorescenčního světla, excitační filtry, dvoubarevný separátor paprsků a blokovací filtry atd.). Fluorescenční zdroj světla – obecně používaná ultravysokotlaká rtuťová výbojka (50-200W), která může vyzařovat různé vlnové délky světla, ale každý fluorescenční materiál má nejsilnější fluorescenční excitační vlnovou délku, takže je potřeba přidat excitační filtry (obecně ultrafialový, fialový, modrý a zelený excitační filtr), takže pouze určitá vlnová délka excitačního světla projde ozářením vzorků, zatímco ostatní světlo je absorbováno. Je tedy nutné přidat excitační filtr (většinou ultrafialové, fialové, modré a zelené excitační filtry), aby vzorkem procházela pouze určitá vlnová délka excitačního světla, zatímco ostatní světlo bylo absorbováno. Když je každá látka ozářena excitačním světlem, emituje během velmi krátké doby viditelnou fluorescenci delší vlnové délky, než má ozařované světlo. Fluorescence má specifičnost, obecně slabší než excitační světlo, aby bylo možné pozorovat specifickou fluorescenci v čočce objektivu za nutností přidat blokovací (nebo supresivní) filtr.
Jeho role je dvojí:
Jedním z nich je absorbovat a blokovat excitační světlo do okuláru, aby nedošlo k narušení fluorescence a poškození oka.
Druhým je vybrat a nechat projít specifickou fluorescenci a ukázat konkrétní fluorescenční barvu. Tyto dva typy filtrů musí být vybrány a použity společně.
