Měření objemu tkáňového bloku pomocí biologických mikroskopů
Kryofixace, zmrazené ultra{0}}tenké řezy a lyofilizace- jsou rutinními metodami pro tkáňovou a buněčnou rentgenovou mikroskopii. Uveďte prosím následující podrobnosti o této metodě:
Biologický mikroskop s bodovým světlem může pohybovat bodovým světlem nahoru a dolů, aby se dosáhlo středního jasu, a clonu proměnné apertury lze také změnit, aby se dosáhlo středního jasu. Je-li světlo ze slunce, může být reflektor vhodně zvýšen a clona proměnného světla může být vhodně zvětšena. Pokud je světlo příliš silné, lze reflektor přiměřeně snížit a přiměřeně zmenšit clonu křižovatky. Pokud se v této situaci stále cítíte oslnivě, můžete se rozhodnout umístit vhodný filtr na držák pod reflektorem. Tento dub dokáže dosáhnout jasu, který vás uspokojí. Úpravou horní a dolní polohy reflektoru lze samozřejmě změnit velikost clony odečítání světla a vybrat vhodné filtry, což vyžaduje určitou dobu praxe a zkušeností.
Velmi důležitou otázkou v biologické mikroskopii je proces odběru vzorků a izolace buněk. Po lyofilizaci-a zalití pryskyřicí (FD) musí být zmrazené ultra-tenké řezy pečlivě zpracovány, aby se zajistilo, že obsah 65 prvků každé části nebude během pozorování a analýzy poškozen. Vzhledem k četným krokům a vysokým nákladům spojeným s rentgenovou mikroanalýzou je politováníhodné činit nesprávné závěry, pokud jsou analyzované buňky po delším a vícestupňovém zpracování poškozené nebo mrtvé. Buňky myokardu oddělené působením želatinázy mají dvě formy, jedna má tvar dlouhé tyčinky a druhá kruhová. Posledně jmenovaný se týká odumírajících buněk, které jsou poškozeny během procesu buněčné separace.
Obsah a distribuce elektrolytů v těchto dvou typech článků se pod biologickým mikroskopem velmi liší. Na je velmi vysoká a K je extrémně nízká v cirkulárních kardiomyocytech a koncentrace Ca v lineárních dendritech je velmi vysoká. Po ověření jinými analytickými metodami bylo prokázáno, že vysoký obsah Na a nízký K v kruhových buňkách a vysoký obsah Ca v mitochondriích jsou výsledkem poškození membrány během buněčné separace. Metoda fixace za studena pro buňky a tkáně často zahrnuje nejprve zchlazení a následné uložení do kapalného dusíku. Pro konzervační efekt je rozhodující zhášení fixace. Živé buňky nebo čerstvé tkáně jsou bohaté na vodu, a když se ochladí, části buněk nebo tkání, které přicházejí do přímého kontaktu s chladivem (zejména při použití kapalného dusíku k chlazení), jsou často nejprve zmrazeny a fixovány, čímž se vytvoří „skořápka“, která brání rozdrcení a fixaci centrální části buněk. Proto se při provádění rentgenové mikroanalýzy často zjistí, že v centrální části větších buněk existují ledové krystaly. Aby k této situaci nedošlo, používá se jako chladivo látka s bodem tání vyšším než kapalný dusík, ale nižším o 806c. Těchto látek je mnoho, ale dají se snadno sehnat a cenově nejdostupnější je koncentrovaný propan (bod varu 42,120c, bod tání 187,10c, molekulová hmotnost 44,1), který má navíc rychlou rychlost chlazení. Jeho nevýhodou ale je, že je hořlavý.
