Úvod do výběru mezi inverzními mikroskopy a fluorescenčními mikroskopy
Mikroskop je důležitým nástrojem v buněčných kulturách a souvisejících experimentech s deriváty. V současné době jsou na trhu různé druhy mikroskopů a výběr mikroskopu, který odpovídá potřebám a je vhodný, je výzvou. Níže si pro snadný výběr představíme principy inverzních mikroskopů a fluorescenčních mikroskopů.
Složení inverzního mikroskopu je stejné jako u běžného mikroskopu, skládá se hlavně ze tří částí: mechanické části, osvětlovací části a optické části. Složení inverzního mikroskopu je stejné jako u běžného svislého mikroskopu, kromě toho, že čočka objektivu a osvětlovací systém jsou obrácené, první pod stolkem a druhý nad stolkem. Tato struktura umožňuje výrazné zvětšení efektivní vzdálenosti mezi osvětlovacím zaostřovacím systémem a stolkem, což usnadňuje umístění silnějších pozorovacích nástrojů, jako jsou kultivační misky a lahvičky na buněčné kultury (samozřejmě jsou přijatelné i skleněné podložní sklíčka), přičemž pracovní vzdálenost mezi čočkou objektivu a materiálem nemusí být příliš velká. Inverzní mikroskop je využíván lékařskými a zdravotnickými institucemi, univerzitami, výzkumnými ústavy pro pozorování mikroorganismů, buněk, bakterií, tkáňových kultur, suspenzí, sedimentů apod. Dokáže kontinuálně pozorovat proces buněčné a bakteriální reprodukce a dělení v kultivačním médiu a dokáže zachytit jakýkoli stav během tohoto procesu. Široce používané v oborech jako je cytologie, parazitologie, onkologie, imunologie, genetické inženýrství, průmyslová mikrobiologie, botanika atd.
Fluorescenční mikroskopie se používá ke studiu absorpce, transportu, distribuce a lokalizace látek v buňkách. U testovaného objektu existují dva způsoby generování fluorescence: spontánní fluorescence, která přímo emituje fluorescenci po ozáření UV; Sekundární fluorescence nastává, když je pozorovaný objekt ošetřen fluorescenčními barvivy a poté ozářen ultrafialovým světlem, aby se emitovala fluorescence. Některé látky v buňkách, jako je chlorofyl, produkují při vystavení ultrafialovému záření spontánní fluorescenci; Některé látky samy o sobě fluorescenci emitovat nemohou, ale pokud jsou obarveny fluorescenčními barvivy nebo fluorescenčními protilátkami, mohou po ozáření ultrafialovým světlem emitovat i sekundární fluorescenci. Fluorescenční mikroskop využívá vysoce účinný bodový zdroj světla k vyzařování určité vlnové délky světla (ultrafialové světlo 365nm nebo purpurově modré světlo 420nm) přes systém barevných filtrů jako excitační světlo, které excituje fluorescenční látky uvnitř preparátu, aby emitovaly různé barvy fluorescence, a poté pozoruje přes zvětšení čočky objektivu a okuláru. Tímto způsobem je i při slabé fluorescenci na silném pozadí snadno rozpoznatelný a má vysokou citlivost. Používá se hlavně pro studium buněčné struktury, funkce a chemického složení.
