Zobrazovací metody světlého-pole a tmavého-pole ve fluorescenční mikroskopii
(1) Metoda zobrazování ve světlém poli (BFI), která umožňuje, aby vysílaný elektronový paprsek v paraxiální oblasti prošel objektivem a vytvořil tak tmavý obraz na světlém pozadí. Čím menší je apertura objektivu, tím větší je kontrast obrazu ve světlém poli; (2) Zobrazování v temném poli (DFI) je technika, která umožňuje pouze části paprsku rozptýleného pod velkým úhlem nebo určitému difrakčnímu paprsku krystalu procházet otvorem objektivu a přitom blokovat vysílaný paprsek. To vytváří jasný grafický obraz na tmavém pozadí. Tato metoda zobrazování v tmavém poli může zlepšit kontrast snímků a je důležitou zobrazovací technikou.
Existují zhruba čtyři metody pro dosažení obrazů tmavého pole pomocí fluorescenčních mikroskopů Leica: (1) udržování vertikálního osvětlení podél optické osy při pohybu apertury objektivu; (2) Použití šikmého osvětlení k zachycení rozptýlených paprsků ve směru optické osy se nazývá zobrazení centrálního tmavého pole (CDFI); (3) Apertura objektivu se středovou zarážkou paprsku a kruhovou průhlednou oblastí; (4) Použijte kruhovou průhlednou kondenzorovou čočku pro snímání světla a centrální kruhovou clonu pro čočku objektivu. Metoda * je zde nejjednodušší, ale používá elektronické zobrazování v oblasti distální objímky, takže aberace je velká a kvalita obrazu není příliš dobrá. Druhá metoda se může vyhnout výše uvedeným nevýhodám, ale apertura objektivu fluorescenčního mikroskopu Leica přijímá pouze malou část rozptýlených difraktovaných elektronů, což má za následek nižší účinnost. Strana clony je často vystavena velkému ostřelování elektrony, což může snadno způsobit asymetrickou kontaminaci a ovlivnit kvalitu obrazu. Prstencová čočka objektivu byla v tomto ohledu vylepšena, ale nevýhodou je, že se obtížně vyrábí a je obtížné dosáhnout úplné osové symetrie. Vzhledem k relativně uvolněným požadavkům na osvětlovací systém může být přijato posledně uvedené řešení, které zahrnuje přidání prstencového otvoru na kondenzor pro zajištění osvětlení dutým paprskem pro vzorek. Účinek tohoto zařízení. Jeho rozlišení obrazu se může blížit rozlišení snímků ve světlém poli, zatímco kontrast je výrazně vylepšen.
