Dvě běžně používané metody mikroskopického pozorování
1, Pozorování v tmavém poli
Tmavé zorné pole je ve skutečnosti osvětlení tmavého pole Jeho vlastnosti se liší od jasného zorného pole, protože přímo nepozoruje osvětlující světlo, ale spíše pozoruje odražené nebo ohýbané světlo kontrolovaného objektu. Zorné pole se proto stává tmavým pozadím, zatímco kontrolovaný objekt představuje jasný obraz
Princip tmavého pole je založen na optickém Tyndallově jevu, kdy prachové částice nemohou být lidským okem pozorovány při vystavení silnému světlu v důsledku difrakce způsobené silným světlem Pokud se na něj světlo promítá šikmo, částice jako by zvětšovaly svůj objem v důsledku odrazu světla, takže jsou viditelné pro lidské oko.
Zvláštním příslušenstvím potřebným pro pozorování v tmavém poli je bodové světlo v tmavém poli. Jeho charakteristikou je, že neumožňuje průchod paprsku světla objektem zdola nahoru, ale mění dráhu světla tak, aby byla nasměrována šikmo k objektu, takže osvětlovací světlo nevniká přímo do čočky objektivu a využívá jasný obraz vytvořený odrazem nebo difrakcí světla na povrchu jasného pole sledovaného objektu, které je mnohem vyšší než u sledovaného tmavého pole. 0,02-0,004
2, metoda kontroly zrcadla s fázovým kontrastem
Úspěšný vynález mikroskopie s fázovým kontrastem při vývoji optických mikroskopů je důležitým úspěchem moderní mikroskopické techniky Víme, že lidské oko dokáže rozlišit pouze vlnovou délku (barvu) a amplitudu (jas) světelných vln. U bezbarvých a průhledných biologických vzorků se při průchodu světla vlnová délka a amplituda příliš nemění, takže je obtížné pozorovat vzorek ve světlém poli
Mikroskop s fázovým kontrastem využívá rozdílu v délce optické dráhy kontrolovaného objektu pro zrcadlovou kontrolu a efektivně využívá interferenční jev světla k transformaci fázového rozdílu, který nemůže lidské oko rozlišit, na rozlišitelný rozdíl amplitud. I bezbarvé a průhledné látky se mohou stát jasně viditelnými To značně usnadňuje pozorování živých buněk, proto se mikroskopie s fázovým kontrastem široce používá v inverzních mikroskopech
Základním principem mikroskopie s fázovým kontrastem je převést rozdíl optické dráhy viditelného světla procházejícího vzorkem na rozdíl amplitud, čímž se zlepší kontrast mezi různými strukturami a ty se stanou jasnými a viditelnými Po průchodu vzorkem světlo podléhá lomu, odchyluje se od původní optické dráhy a je zpožděno o 1/4 λ (vlnová délka). Pokud se rozdíl optické dráhy zvýší nebo sníží o další 1/4 λ, rozdíl v optické dráze se stane 1/2 λ a interference mezi dvěma světelnými paprsky se po spojení os zvýší nebo sníží, čímž se zlepší kontrast Pokud jde o strukturu, mikroskopy s fázovým kontrastem mají dva
speciální rozdíly od běžných optických mikroskopů:
1. Mezi světelným zdrojem a kondenzorem je umístěna prstencová clona, jejíž funkcí je tvořit dutý kužel světla, který prochází kondenzorem a zaostřuje na preparát.
2. Úhlová fázová destička: K čočce objektivu je přidána fázová destička potažená fluoridem hořečnatým, která dokáže zpozdit fázi přímého nebo ohybového světla o 1/4 λ. Dá se rozdělit na dva typy:
(1) . A+fázová deska: Zpoždění přímého světla o 1/4 λ a po spojení os přidejte dvě sady světelných vln. Amplituda se zvyšuje a struktura vzorku se stává jasnější než okolní médium, čímž se vytváří jasný kontrast (nebo negativní kontrast)
(2) . B+phase plate: Zpoždění ohybu světla o 1/4 λ a odečtení světelných vln po spojení os dvou sad světelných paprsků, což má za následek snížení amplitudy a vytvoření tmavého kontrastu (nebo pozitivního kontrastu). Struktura se stává tmavší než okolní médium
