Existují dva typy fluorescenčních mikroskopů na základě jejich světelných drah.
1. Transmisní fluorescenční mikroskop: Zdroj excitačního světla prochází materiálem vzorku přes kondenzátor, aby excitoval fluorescenci. Běžně se používá kolektor tmavého pole nebo lze použít běžný kolektor a reflektor je nastaven tak, aby odváděl a postranně vyzařoval excitační světlo do vzorku. Jedná se o starší fluorescenční mikroskop. Výhodou je, že fluorescence je silná při malém zvětšení, ale nevýhodou je, že fluorescence s rostoucím zvětšením slábne. Proto je lepší pozorovat větší vzorky materiálů.
2. Epi-fluorescenční mikroskop je nový typ fluorescenčního mikroskopu vyvinutý v moderní době. Rozdíl od výše uvedeného spočívá v tom, že excitační světlo dopadá z čočky objektivu dolů na povrch vzorku, to znamená, že stejná čočka objektivu se používá jako osvětlovací kondenzor a čočka objektivu pro sběr fluorescence. K optické dráze je třeba přidat dvoubarevný dělič paprsků, což je 45 % u optického uranu. Úhel, excitační světlo se odráží do čočky objektivu a soustředí se na vzorek. Fluorescence generovaná vzorkem a excitační světlo odražené povrchem čočky objektivu a povrchem krycího skla vstupují do čočky objektivu současně a vracejí se do dichromatického děliče paprsků, takže excitační světlo, oddělené od fluorescence, zbytková excitace světlo je pak absorbováno blokovacím filtrem. Pokud použijete různé kombinované vložky excitačního filtru/dvoubarevného rozdělovače paprsku/blokovacího filtru, můžete vyhovět potřebám různých produktů fluorescenční reakce. Výhodou tohoto typu fluorescenčního mikroskopu je, že zorné pole je rovnoměrně osvětleno, obraz je jasný a čím větší zvětšení, tím silnější fluorescence.
(2) Jak používat fluorescenční mikroskop.
1. Zapněte zdroj světla a ultravysokotlaká rtuťová výbojka se musí několik minut zahřívat, aby dosáhla svého nejjasnějšího bodu.
2. Transmisní fluorescenční mikroskopy vyžadují instalaci požadovaného excitačního filtru mezi zdroj světla a kondenzor a instalaci odpovídajícího blokovacího filtru za čočkou objektivu. Epifluorescenční mikroskopy potřebují vložit požadovaný excitační filtr/dvoubarevný dělič paprsků/blokovací filtr do štěrbiny světelné dráhy.
3. Pro pozorování použijte mikroskop s malým zvětšením a upravte střed světelného zdroje podle nastavovacích zařízení různých modelů fluorescenčních mikroskopů tak, aby byl umístěn ve středu celého osvětlovacího bodu.
4. Umístěte vzorek a upravte zaostření, abyste mohli pozorovat. Při používání věnujte pozornost: Nesledujte filtr přímo očima, aby nedošlo k poškození zraku; při pozorování preparátu olejovou čočkou musíte použít speciální nefluorescenční olejovou čočku; vysokotlakou rtuťovou výbojku nelze znovu otevřít ihned po jejím vypnutí. Po 5 minutách ji lze znovu spustit, jinak bude nestabilní a ovlivní životnost rtuťové výbojky.
(3) Pozorujte pod fluorescenčním mikroskopem na výukové platformě pomocí filtru modrofialového světla. Je vidět, že pasáž je o. V buňkách obarvených fluorescenčním barvivem 01% akridinově oranžové jsou jádro a cytoplazma excitovány za vzniku dvou různých barev fluorescence (tmavě zelené a oranžově červené).
