Principy a strukturální charakteristiky fluorescenčních mikroskopů
Fluorescenční mikroskop využívá vysoce účinný bodový světelný zdroj k vyzařování určité vlnové délky světla (jako je ultrafialové světlo 3650 nebo purpurově modré světlo 4200) přes systém barevných filtrů jako excitační světlo, které excituje fluorescenční látky ve vzorku, aby emitovaly různé barvy fluorescence, a poté pozoruje prostřednictvím zvětšení čočky objektivu a okuláru. Tímto způsobem je i při slabé fluorescenci na silném pozadí snadno rozpoznatelný a má vysokou citlivost. Používá se hlavně pro studium buněčné struktury, funkce a chemického složení. Základní struktura fluorescenčního mikroskopu se skládá z běžného optického mikroskopu a některých doplňků, jako je zdroj fluorescenčního světla, excitační filtr, dvoubarevný dělič paprsků a blokovací filtr. Fluorescenční světelný zdroj - obvykle používá ultra-vysokotlaké rtuťové výbojky (50–200 W), které mohou vyzařovat světlo různých vlnových délek, ale každá fluorescenční látka má vlnovou délku excitačního světla, která produkuje nejsilnější fluorescenci. Proto je potřeba přidat excitační filtry (většinou ultrafialové, fialové, modré a zelené excitační filtry), které umožní průchod pouze určité vlnové délky excitačního světla a ozáření vzorku a zároveň pohlcení veškerého ostatního světla. Každá látka po ozáření excitačním světlem emituje ve velmi krátké době viditelnou fluorescenci s vlnovou délkou delší, než je vlnová délka ozařování. Fluorescence má specificitu a je obecně slabší než excitační světlo. Aby bylo možné pozorovat specifickou fluorescenci, je třeba za čočku objektivu přidat blokovací (nebo potlačující) filtr.
Jeho funkce jsou dvojí: za prvé absorbovat a blokovat excitační světlo pronikající do okuláru, aby se zabránilo rušení fluorescence a poškození očí; za druhé pro výběr a umožnění průchodu specifické fluorescence, vykazující specifickou fluorescenční barvu. Je nutné použít kombinaci dvou typů filtrů.
