Základy a konstrukční prvky fluorescenčního mikroskopu
Fluorescenční mikroskopie využívá bod s vysokou světelnou účinností k vyzařování světla o určité vlnové délce (jako je ultrafialové světlo 3650 palců nebo purpurově modré světlo 4200 palců) přes filtrační systém jako excitační světlo, které excituje fluorescenční látky ve vzorku a emituje fluorescenci různé barvy Poté pozorujte pomocí zvětšení čočky objektivu a okuláru. Tímto způsobem, pod silným kontrastním pozadím, i když je fluorescence velmi slabá, je snadno identifikovatelná a má vysokou citlivost. Používá se především pro výzkum buněčné struktury a funkce a chemického složení. Základní konstrukce fluorescenčního mikroskopu se skládá z běžného optického mikroskopu a některého příslušenství (jako je zdroj fluorescenčního světla, excitační filtr, dvoubarevný dělič paprsků a blokovací filtr atd.). Fluorescenční světelný zdroj – obecně používejte ultra vysokotlakou rtuťovou výbojku (50-200W), která může vyzařovat světlo různých vlnových délek, ale každá fluorescenční látka má excitační vlnovou délku, která produkuje nejsilnější fluorescenci, takže excitační filtr ( Obecně platí, existují ultrafialové, fialové, modré a zelené excitační filtry), které propouštějí pouze excitační světlo určité vlnové délky a ozařují vzorek, zatímco jiné světlo pohlcují. Každá látka je po ozáření excitačním světlem ve velmi krátké době emitována viditelnou fluorescencí s delší vlnovou délkou, než je vlnová délka ozařování. Fluorescence je specifická a obecně slabší než excitační světlo. Aby bylo možné pozorovat specifickou fluorescenci, musí být za čočkou objektivu přidáno blokování (nebo potlačení) a použito ve spojení s ní.
Rozdíl mezi fluorescenčním mikroskopem a běžným mikroskopem
1. Metoda osvětlení je obvykle episkopická, to znamená, že zdroj světla je promítán na vzorek přes čočku objektivu;
2. Světelným zdrojem je ultrafialové světlo, vlnová délka je kratší a rozlišení je vyšší než u běžných mikroskopů;
3. Existují dva speciální filtry, jeden před zdrojem světla se používá k odfiltrování viditelného světla a jeden mezi okulárem a čočkou objektivu se používá k odfiltrování ultrafialových paprsků k ochraně lidského oka.
Fluorescenční mikroskop je také druh optického mikroskopu, hlavní rozdíl je v tom, že excitační vlnová délka obou je odlišná. To určuje rozdíl mezi fluorescenčním mikroskopem a běžným optickým mikroskopem z hlediska struktury a použití.
Fluorescenční mikroskopie je základním nástrojem v imunofluorescenční cytochemii. Skládá se z hlavních komponent, jako je zdroj světla, systém filtračních desek a optický systém. Jedná se o použití určité vlnové délky světla k vybuzení vzorku, aby emitoval fluorescenci, a ke sledování fluorescenčního obrazu vzorku zesílením systému čočky objektivu a okuláru.
