Rozdíl mezi laserovým konfokálním mikroskopem a tradičním optickým mikroskopem
Laserová skenovací konfokální fluorescenční mikroskopie je relativně pokročilý nástroj pro analýzu molekulární a buněčné biologie, který využívá počítač, laser a technologii zpracování obrazu k získání trojrozměrných dat biologických vzorků. Používá se především k pozorování struktury živých buněk a biologických změn specifických molekul a iontů, kvantitativní analýze a kvantitativnímu stanovení v reálném čase.
Princip laserové konfokální mikroskopie: použijte osvětlovací dírku umístěnou za světelným zdrojem a detekční dírku umístěnou před detektorem pro realizaci bodového osvětlení a detekci bodu. Světlo vyzařované ze zdroje světla přes osvětlovací dírku je zaostřeno na bod v ohniskové rovině vzorku a emitovaná fluorescence z tohoto bodu je zobrazena na detekční dírce a jakékoli vyzařované světlo mimo tento bod je blokováno detekcí. dírka. Osvětlovací dírka a detekční dírka jsou konjugovány s ozařovaným bodem nebo detekovaným bodem, takže detekovaný bod je konfokální bod a rovina, kde se nachází detekovaný bod, je konfokální rovina.
Počítač zobrazuje detekované body na obrazovce počítače ve formě obrazových bodů. Aby se vytvořil úplný obraz, skenovací systém v optické dráze skenuje v ohniskové rovině vzorku, aby vytvořil úplný konfokální obraz. Dokud se stolek pohybuje nahoru a dolů podél osy Z, přesune se nová vrstva vzorku do konfokální roviny a nová vrstva vzorku se zobrazí na monitoru. S kontinuálním pohybem osy Z lze získat souvislé obrazy různých vrstev vzorku. Světle řezaný obrázek.
Rozdíl mezi tradičními světelnými mikroskopy
Tradiční fluorescenční mikroskopy mají nepřekonatelný nedostatek: fluorescenční struktury mimo ohniskovou rovinu jsou rozmazané a rozmazané. Důvodem je, že většina biologických vzorků má překrývající se struktury. Pokud jsou fluorescenčně značené struktury distribuovány na různých úrovních a překrývají se, rozptylovaná fluorescence nad nebo pod ohniskovou rovinou je také přijímána čočkou objektivu a rozlišení fluorescenčního mikroskopu se výrazně zlepší. snížit.
Na základě tradičních optických mikroskopů využívají laserové skenovací konfokální mikroskopy jako zdroj světla laserové světlo, přijímají princip a zařízení konjugovaného ostření a využívají počítače k provádění digitálního zpracování obrazu, pozorování, analýzy a výstupu pozorovaných objektů. Vzorek může být tomograficky skenován a zobrazen pro nedestruktivní pozorování a analýzu trojrozměrné prostorové struktury buněk. Zároveň s využitím imunofluorescenčního značení a iontových fluorescenčních značících sond může tato technologie nejen pozorovat fixované buňky a řezy tkání, ale také provádět dynamické pozorování a detekci struktury, molekul, iontů a životních aktivit živých buněk v reálném čase. na subcelulární úrovni Pozorování fyziologických signálů, jako je Ca2 plus, hodnota pH, membránový potenciál a změny v morfologii buněk, se stalo novou generací výkonných výzkumných nástrojů v oblasti morfologie, molekulární buněčné biologie, neurovědy, farmakologie a genetiky.
