Technické parametry a dovednosti použití fluorescenčního mikroskopu
Technické parametry fluorescenčního mikroskopu 1. Širokoúhlý okulár 2. Achromatická čočka objektivu 3. Čtyřotvorový konvertor čočky objektivu 4. Dopadající fluorescenční zařízení Modrá (B) Zelená (G) excitační systém 100W rtuťová výbojka 5. Koaxiální hrubá mikrozaostřovací mechanismus: rozsah zaostření 15 mm Hodnota mikro mřížky 0,002 mm 6. Dvouvrstvý mechanický pracovní stůl rozsah podélného pohybu: 70 mm Rozsah bočního pohybu: 50 mm
Technické parametry fluorescenčního mikroskopu
1. Širokoúhlý okulár
2. Achromatická čočka objektivu
3. Čtyřotvorový konvertor objektivu
4. Padající fluorescenční zařízení Modrá (B) Zelená (G) Budicí systém 100W rtuťová výbojka
Mechanismus koaxiálního hrubého mikro ostření: rozsah ostření: 15 mm, hodnota mikro mřížky: 0,002 mm
6. Dvouvrstvý mechanický pracovní stůl
Rozsah podélného pohybu: 70 mm Rozsah bočního pohybu: 50 mm
Tipy a metody pro použití fluorescenční mikroskopie
(1) Snímek
Tloušťka sklíčka by měla být mezi 0,8 a 1,2 mm. Pokud je sklíčko příliš tlusté, jednak pohltí příliš mnoho světla a jednak nemůže způsobit shromažďování excitačního světla na preparátu. Podložní sklíčko musí být hladké a čisté, s rovnoměrnou tloušťkou a bez výrazné spontánní fluorescence. Někdy jsou potřeba sklíčka z křemenného skla.
(2) Krycí sklo
Tloušťka krycího skla je asi 0,17 mm a je hladké a čisté. Pro zvýšení buzení lze také použít interferenční krycí sklo. Jedná se o speciální krycí sklo potažené několika vrstvami látek (např. fluorid hořečnatý), které mají různé interferenční účinky na různých vlnových délkách světla. Může umožnit hladký průchod fluorescence a zároveň odrážet excitaci, která může excitovat vzorek.
(3) Vzorek
Tkáňové řezy nebo jiné vzorky by neměly být příliš silné. Pokud jsou například příliš silné, většina excitačního světla se spotřebuje ve spodní části preparátu, zatímco horní část přímo pozorovaná čočkou objektivu není dostatečně vybuzena. Kromě toho může úsudek ovlivnit překrývání buněk nebo maskování nečistot.
（4） Montážní prostředek
Glycerin se běžně používá jako montážní činidlo a musí být bez spontánní fluorescence, bezbarvý a průhledný. Jas fluorescence je jasnější při pH 8,5 až 9,5 a není snadné rychle slábnout. Proto se jako montážní činidlo běžně používá ekvivalentní směs glycerolu a 0,5 mol/l roztoku uhličitanového pufru s pH 9.0 až 9,5.
（5） Zrcadlový olej
Obecně platí, že při použití fluorescenčního mikroskopu v tmavém poli a olejového mikroskopu k pozorování vzorků je nutné použít olej na čočky. Nejlepší je použít speciální nefluorescenční olej na čočky, který lze nahradit i zmíněným glycerolem. Lze použít i tekutý parafín, ale index lomu je nízký, což má mírný vliv na kvalitu obrazu.
