Přednosti a omezení multifotonových laserových skenovacích mikroskopů
Výhody jsou následující:
1. Při buzení červeným nebo infračerveným světlem je rozptyl světla malý (rozptyl malých částic je nepřímo úměrný čtvrté mocnině vlnové délky).
2. Nepotřebujete dírky, dokáže shromáždit více rozptýlených fotonů ze zobrazovacího průřezu-.
3. Dírkové dírky nedokážou rozlišit rozptýlené fotony emitované z rozostřených nebo ohniskových oblastí a multifotony mají lepší poměr signálu-k{2}}šumu při hloubkovém zobrazování.
4. Ultrafialové nebo viditelné světlo použité pro excitaci jednoho fotonu je snadno absorbováno a zeslabeno vzorkem předtím, než paprsek dosáhne ohniskové roviny, což ztěžuje excitaci hlubokých vrstev.
5. Z hlediska pozorování biologickou mikroskopií je prvním hlediskem nepoškodit aktivní stav samotného organismu a zachovat cirkulaci vody, koncentraci iontů, kyslíku a živin. V oblasti pozorování světla musí tepelná i fotonová energie zůstat v rámci dávky ozáření a světelná energie, která nepoškozuje buňky.
6. Multifotonová mikroskopie má také mnoho výhod. Pokud jde o trojrozměrné-rozlišení, hloubkovou invazi, účinnost rozptylu, světlo na pozadí, odstup signálu-k{4}}šumu, ovládání atd., laserové mikroskopy mají bezkonkurenční nebo vynikající vlastnosti, které předchozí laserové mikroskopy neměly.
Multifotonový konfokální laserový skenovací mikroskop byl rozšířen do různých oblastí výzkumu a aplikací Dokáže provádět trojrozměrné nedestruktivní pozorování vzorků v jejich přirozeném stavu a zlepšit rozlišení a poměr signálu-k{3}}šumu systému. Využitím změn materiálových vlastností po vícefotonové excitaci lze dosáhnout trojrozměrného{4}jakého{4}jakého{1}směru lze mikrofabraci} ukládat a trojrozměrně ukládat data má vysokou aplikační hodnotu Lze se domnívat, že s dalším rozvojem mechanických, materiálových a laserových technologií souvisejících s vícefotonovou konfokální mikroskopií bude mít vícefotonová konfokální laserová skenovací mikroskopie větší rozvoj a širší aplikace
Nevýhody jsou následující:
1. Pouze pro fluorescenční zobrazování.
2. Pokud vzorek obsahuje chromofory, které mohou absorbovat excitační světlo, jako jsou pigmenty, může být vzorek vystaven tepelnému poškození.
3. Rozlišení je mírně sníženo, i když jej lze zlepšit současným použitím konfokálních malých otvorů, dojde ke ztrátě signálu.
4. Vzhledem k omezením drahých ultrarychlých laserů jsou náklady na multifotonové rastrovací mikroskopy relativně vysoké.
