Dovednosti a metody použití fluorescenčního mikroskopu
Technické parametry fluorescenčního mikroskopu 1. Širokoúhlý okulár 2. Achromatický objektiv 3. Čtyřotvorový konvertor objektivu 4. Vyzařovací fluorescenční zařízení modrá (b) zelená (g) excitační systém 100W rtuťová výbojka 5. Koaxiální hrubá mikrozaostřovací mechanismus: rozsah ostření 15 mm, hodnota mikrosítě 0,002 mm 6. Rozsah podélného posuvu dvouvrstvého mechanického pracovního stolu: 70 mm, rozsah bočního posuvu: 50 mm.
Dovednosti a metody použití fluorescenčního mikroskopu
(1) sklíčka
Tloušťka diapozitivu by měla být mezi 0.8-1,2 mm až 1,2 mm. Příliš silné sklíčko na jedné straně neabsorbuje mnoho světla a na druhé straně nezpůsobí, že se excitační světlo shromáždí na vzorku. Podložní sklíčko musí být hladké, jednotné tloušťky a bez zjevné spontánní fluorescence. Někdy jsou potřeba sklíčka Shi Ying.
(2) Krycí sklo
Krycí sklo má tloušťku asi 0,17 mm a je hladké. Pro zesílení excitačního světla lze použít i interferenční krycí sklo, což je druh speciálního krycího skla s několika vrstvami látek (např. fluorid hořečnatý), které mají různé interferenční účinky na různých vlnových délkách světla. Může zajistit hladký průchod fluorescence a odrážení excitačního světla a toto odražené excitační světlo může excitovat vzorek.
(3) Vzorky
Tkáňové řezy nebo jiné vzorky by neměly být příliš silné. Pokud je příliš silný, většina excitačního světla se spotřebuje ve spodní části preparátu, zatímco horní část přímo pozorovaná čočkou objektivu není plně vybuzena. Kromě toho úsudek ovlivňuje překrývání buněk nebo maskování nečistot.
(4) těsnicí prostředek
Jako těsnící prostředek se běžně používá glycerol, který musí být bezbarvý a průhledný bez spontánní fluorescence. Jas fluorescence je jasný při pH 8,5 ~ 9,5 a není snadné rychle slábnout. Proto se jako těsnící činidlo často používá ekvivalentní směs glycerolu a 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 karbonátového pufru.
(5) zrcadlový olej
Při pozorování vzorků fluorescenčním mikroskopem v tmavém poli a olejovým zrcadlem se obecně musí používat zrcadlový olej. Nejlepší je použít speciální nefluorescenční zrcadlový olej, nebo lze místo něj použít výše uvedený glycerin. Lze použít i tekutý parafín, ale index lomu je nízký, což má mírný vliv na kvalitu obrazu.
