Několik poznámek a tipů pro použití mikroskopie s fázovým kontrastem
Použití mikroskopie s fázovým kontrastem
1) Nainstalujte zařízení pro fázový kontrast: sejměte kondenzorovou čočku běžného mikroskopu a nainstalujte kondenzorovou čočku s prstencovou clonou na odpovídající mikroskop; vyjměte běžnou čočku objektivu mikroskopu a nahraďte ji čočkou objektivu s fázovou destičkou; vyměňte okulár za zaostřovací okuláry pro mikroskopy s fázovým kontrastem; speciální zelené filtry (někdy nejsou nutné) jsou umístěny na vstupu světla do světelného zdroje.
2) Zarovnání a zaostření světla: Upravte zaostřovací okulár a šroub pro nastavení tloušťky, dokud nebude v zorném poli jasně vidět bílý kruh a černý kruh. Černý kruh je pevný a bílý kruh lze posunout nastavením šroubu na kondenzorovém zařízení tak, aby se černý kruh a bílý kruh zcela shodovaly. Pro kontrolu sejměte zaostřovací okulár a nahraďte jej původním okulárem mikroskopu.
Analýza problémů při použití mikroskopu s fázovým kontrastem
1. Vliv tloušťky vzorku Při pozorování fázovým kontrastem by tloušťka vzorku měla být 5 μm nebo tenčí. Při použití silnějšího vzorku je horní vrstva vzorku velmi jasná, ale hluboká vrstva bude rozmazaná a způsobí interferenci fázového posunu. a rozptylu světla.
2. Vliv krycího sklíčka a podložního sklíčka Vzorek musí být zakryt krycím sklíčkem, jinak se světlý prstenec prstencové membrány a tmavý prstenec fázové desky jen obtížně překrývají. Pozorování ve fázovém kontrastu má také vysoké požadavky na kvalitu skla diaskla a krycího skla. Pokud se objeví škrábance, nerovnoměrná tloušťka nebo nerovnosti, dojde ke zkreslení jasných prstenců a fázové interferenci. Kromě toho, když je sklíčko příliš silné nebo příliš tenké, světlý prstenec prstencové membrány se zvětší nebo zmenší.
3. Halo a efekt vyblednutí V procesu zobrazování mikroskopem s fázovým kontrastem, kdy určitá struktura ztmavne v důsledku fázového zpoždění, nejde o ztrátu světla, ale o výsledek redistribuce světla v rovině obrazu. Světlo, které se zjevně ztrácí v tmavých oblastech, se tedy bude jevit jako jasné halo kolem tmavších objektů. To je nevýhoda mikroskopie s fázovým kontrastem, která brání pozorování jemných struktur a jev halo je závažnější, když je prstencová clona velmi úzká. Dalším jevem v mikroskopii s fázovým kontrastem je efekt stínování, který se týká ztráty kontrastu na okrajích větší oblasti se stejným fázovým zpožděním při pozorování fázovým kontrastem.
4. Inverze fáze Při n'n je kontrast světla a tmy přesně opačný, což se nazývá inverze fáze. Je nerozpoznatelné, když fázový rozdíl δ=0 a kontrast se zvětší s nárůstem δ, a fázová inverze se objeví, když δ nadále narůstá na určitou hodnotu. Při použití čočky objektivu s vysokou hodnotou absorbance 90 (vysoký kontrast) je tato transformační hodnota asi 0,55λ a při použití čočky objektivu se standardní hodnotou absorbance 70% je to asi 0,33λ . Objektivy s vyššími hodnotami absorbance by měly být použity k vyřešení menších rozdílů optických drah.
