Požadavky na výrobu preparátů pro fluorescenční mikroskop
(1) Podložní sklíčko
Tloušťka diapozitivu by měla být mezi 0,8 a 1,2 mm. Pokud je sklíčko příliš silné, jednak pohltí více světla a jednak nedovolí, aby se excitační světlo shromáždilo na preparátu. Podložní sklíčko musí být hladké, stejnoměrné tloušťky a nesmí vykazovat zjevnou spontánní fluorescenci. Někdy jsou potřeba sklíčka z křemenného skla.
(2) Zakryjte sklíčko
Tloušťka krycího skla je asi 0,17 mm a je hladká. Pro zesílení excitačního světla lze také použít interferenční krycí sklo. Jedná se o speciálně navržené krycí sklo s několika vrstvami látek (např. fluorid hořečnatý), které mají různé interferenční účinky na světlo různých vlnových délek. Může umožnit hladký průchod fluorescence, zatímco reflexní excitační světlo může excitovat vzorek.
(3) Vzorek
Plátky tkáně nebo jiné vzorky by neměly být příliš silné. Pokud jsou příliš silné, většina excitačního světla se spotřebuje ve spodní části preparátu, zatímco horní část přímo pozorovaná čočkou objektivu není plně vybuzena. Kromě toho může úsudek ovlivnit překrývání buněk nebo maskování nečistot.
(4) Těsnicí prostředek
Glycerin se běžně používá jako montážní činidlo, které nesmí mít spontánní fluorescenci, je bezbarvý a průhledný. Jas fluorescence je poměrně jasný při pH 8.{1}},5 a není snadné jej rychle slábnout. Proto se jako montážní činidlo běžně používá stejná směs glycerolu a 0,5mol/lpH9.0-9,5karbonátového pufru.
(5) Zrcadlový olej
Při použití fluorescenčního mikroskopu v tmavém poli a olejového mikroskopu k pozorování preparátů je nutné použít olej na čočky. Nejlepší je použít speciálně vyrobený nefluorescenční olej na čočky, který lze také nahradit glycerolem, jak je uvedeno výše. Lze použít i tekutý parafín, ale index lomu je nízký a má mírný vliv na kvalitu obrazu.
