Požadavky na přípravu rutinních vzorků pro mikroskopii
Konfokální mikroskop je epochální high-tech nový produkt vyvinutý v 80. letech minulého století a je dnes jedním z důležitých analytických nástrojů v molekulární biologii a vědě o živé přírodě. Konfokální mikroskopie je založena na zobrazování fluorescenčním mikroskopem s přidaným laserovým skenovacím zařízením, využívajícím počítač pro zpracování obrazu k získání fluorescenčních obrazů mikrostruktury uvnitř buněk nebo tkání a ke sledování změn v morfologii mnoha fyziologických signálních strojů na subcelulární úrovni. Staňte se výkonným výzkumným nástrojem v oblasti morfologie, molekulární buněčné biologie, neurovědy, farmakologie, genetiky a dalších vědeckých oborů.
Příprava vzorku pro konfokální mikroskopii je kritickým krokem před detekcí. Vzorky je třeba označit fluorescenčními sondami (jednoduché, dvojité, trojité).
a
Vzorky mohou být fixované nebo živé tkáně nebo fixované nebo živé adherentní kultury. Buňky by měly být kultivovány na speciálních malých kultivačních miskách nebo krycích sklíčkách Confocal. Buňky suspendujte, protřepejte nebo pusťte řezy a zakryjte krycím filmem krycí sklíčka. Tloušťka Zda vzorku je asi 1~2 mm, tloušťka použitého krycího skla by měla být menší než 0,17 mm a tloušťka podložního skla by měla být mezi 0,8~1,2 mm a povrch je hladký, tloušťka je stejnoměrná a není zde patrná interferenční fluorescence. Upevňovací médium se často používá pro fixované vzorky a pro montáž se běžně používá glycerol připravený v PBS s pH 8.5-9.
Požadavky na rutinní přípravu vzorků:
1. Výběr barviv
Protože konfokální mikroskop používá jako zdroj světla laser s jednou vlnovou délkou, výběr fluorescenčních barviv by měl být založen na vlnové délce laseru vybaveného konfokálním mikroskopem. Pokud je ve stejném vzorku více fluorescenčních barviv, měla by se co nejvíce zohlednit také jejich emisní vlnová délka. Nepřekrývejte se, abyste předešli problémům se zkříženými barvami.
2. Výběr nosiče vzorku
Obecně je vysoce výkonným objektivem konfokálního mikroskopu olejová čočka, jeho numerická apertura je malá a pracovní vzdálenost mezi čočkou a vzorkem nesmí být větší než 0,17 mm. Sklíčka a krycí sklíčka jsou v pořádku. Pokud se jedná o suspendované buňky nebo suspendované částice, lze k přenášení vzorku k pozorování použít Petriho misku určenou pro konfokální mikroskop.
3. Výběr montážního média
Pokud je třeba vzorek pozorovat pouze jednou a fluorescenci nelze snadno uhasit, můžete zvolit určitou koncentraci směsi glycerolu pro uzavření sklíčka. Pokud je třeba vzorek umístit na určitou dobu a odebrat vícekrát, mělo by být vybráno montážní médium zhášející fluorescenci, aby se snížila ztráta fluorescenčních signálů.
