Principy mikroskopického mikrometru pro stanovení velikosti buněk
Velikost mikrobiálních buněk je jedním z důležitých podkladů pro klasifikaci a identifikaci mikroorganismů. Mikroorganismy jsou drobné a je třeba je pozorovat pomocí mikroskopu. Pro měření velikosti mikrobiálních buněk je nutné je také měřit pod mikroskopem za pomoci speciálního mikrometru.
Mikrometr mikroskopu se skládá ze dvou částí: stolního mikrometru a okulárového mikrometru.
Stolový mikrometr je podložní sklíčko s rytinou uprostřed (obr. 2-7). Celková délka menzury je 1 mm.
Určeno pro kalibraci okulárových mikrometrů. Mikrometr okuláru lze použít přímo k měření velikosti buňky. Jedná se o kruhové podložní sklíčko (obrázek 2-8) se stejným dělením uprostřed, které je umístěno na separátoru v okuláru pro měření. Celková délka mikrometrické stupnice okuláru je 1 cm a je rozdělena na 100 malých buněk, z nichž každá je dlouhá 100 μm. Protože okulárový mikrometr měří velikost obrazu mikrobiálních buněk po zvětšení mikroskopem, skutečné měřítko představuje délku. Mění se se zvětšením použitého okuláru a objektivu a délkou tubusu objektivu. Proto je nutné jej před použitím zkalibrovat stolním mikrometrem, aby se při určitém zvětšení zjistila délka reprezentovaná každou malou buňkou mikrometru okuláru. a poté pomocí okulárového mikrometru přímo změřte velikost měřeného objektu.
Výpočet kalibračního faktoru pro mikrometr okuláru: stupnice mikrometru okuláru (μ=známá vzdálenost mezi dvojitými překrývajícími se čarami na stolním mikrometru / dvojitá překrývající se čára m) mezi stupnicí mikrometrů okuláru pravítka
Příklad 1: Pokud je známá vzdálenost mezi dvěma překrývajícími se čarami 2 stupňové mikrometrické stupnice (2 X 10 μ
m), což odpovídá 13 mikrometrickým stupnicím okuláru
Korekční faktor pro každou mikrometrickou stupnici okuláru=20 μm / 13=1,54 μm
Příklad 2: Je-li mikroorganismus pozorován okulárovým mikrometrem mikroskopu s délkou 5 mikrometrických stupnic okuláru, pak
Mikrobiální délka=počet dílků měřených mikrometrem okuláru X korekční faktor pro každý okulárový mikrometrický dílek=5 X 1,54 μm=7,70 μm
