Příprava a pozorování biologických vzorků pro elektronovou mikroskopii
Rozlišení mikroskopu závisí na vlnové délce použitého světla, elektronový mikroskop se začal objevovat v roce 1933 je dán použitím mnohem kratší vlnové délky než viditelné světlo elektronového paprsku jako zdroje světla, takže rozlišení to může dosáhnout, než optický mikroskop výrazně zlepšil. Rozdílný zdroj světla také určuje řadu rozdílů mezi elektronovým mikroskopem a optickým mikroskopem.
Podle rozdílů v principu zobrazování elektronového paprsku a roli vzorku na různých cestách byl vyvinut moderní elektronový mikroskop do řady typů, v současnosti * běžně používaný je transmisní elektronový mikroskop a rastrovací elektron mikroskop, první může být v rozsahu 1,000-1,000,000násobku celkového zvětšení rozsahu změn, druhý může být v celkovém zvětšení { {4}}, 000 krát celkové zvětšení změn mezi. Tento experiment se zaměřuje na přípravu vzorků pro dva typy mikroskopů, transmisní elektronový mikroskop a rastrovací elektronový mikroskop.
Materiály
1. Kmen Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) šikmo.
2. Roztoky nebo činidla Amylacetát, koncentrovaná kyselina sírová, bezvodý ethanol, sterilní voda, 2% sodná sůl kyseliny fosfowolframové (pH 6.5-8.0) vodný roztok, 0,3% roztok polyvinylformaldehydu (rozpuštěný v trichlormethanu), cytochrom c, octan amonný, plazmid pBR322.
3. Nástroje nebo jiné příslušenství Obyčejný optický mikroskop, měděná síťka, porcelánová nálevka, kádinka, plochá miska, sterilní byreta, sterilní pinzeta, lanceta, sklíčka, ** počítací destička, vakuová potahovací jednotka, sušička kritických bodů atd.
Operační kroky
(I) Příprava vzorků a pozorování transmisní elektronovou mikroskopií
1. Úprava kovové sítě
Vzorky pro optickou mikroskopii jsou umístěny na sklíčka k pozorování. Avšak v transmisní elektronové mikroskopii, protože elektrony nemohou proniknout skleněnou tabulí, lze jako nosič použít pouze síťový materiál, obvykle nazývaný nosná síť. Nosnou síťovinu lze rozdělit do mnoha různých specifikací kvůli různým materiálům a tvarům, z nichž * běžně používaná je 200-400 síť (počet otvorů) měděná síť. Měděná síťovina by měla být před použitím ošetřena, aby se z ní odstranily nečistoty a udržela se v čistotě, jinak to ovlivní kvalitu nosné fólie a jasnost fotografií. Měděné síto použité v tomto experimentu je 400 mesh, které lze zpracovat následujícím způsobem: nejprve jej bělte několik hodin amylacetátem, poté několikrát opláchněte destilovanou vodou a poté vybělte v bezvodém ethanolu po dobu několika hodin. dehydratace. Pokud měděná síťka výše uvedeným způsobem stále není čistá, lze ji použít k naředění koncentrované kyseliny sírové (1:1) ponořenou na 1 ~ 2 minuty nebo do 1% roztoku NaOH vařeného několik minut, několikrát opláchnout destilovanou vodou , umístěný v dehydrataci bezvodého ethanolu, který má být použit.
2. Příprava nosné fólie
Při pozorování vzorků by nosná síť měla být také pokryta vrstvou nestrukturovaného stejnoměrného filmu, jinak malé vzorky vytečou z otvorů v nosné síti, tato vrstva filmu se obvykle nazývá nosný film nebo nosný film. Nosný film by měl být transparentní pro elektrony a jeho tloušťka by obecně měla být menší než 20 nm; při dopadu elektronového paprsku by měl mít film také určitý stupeň mechanické pevnosti, může udržovat stabilitu struktury a má dobrou tepelnou vodivost; kromě toho by nosná síť neměla mít žádnou viditelnou strukturu pod elektronovým mikroskopem a neměla by mít chemickou reakci s neseným vzorkem a neinterferovat s pozorováním vzorku a její tloušťka je obecně asi 15 nm. Nosná fólie může být vyrobena z plastové fólie (např. ohnivá bavlněná fólie, polyethylenformaldehydová fólie atd.), uhlíková fólie nebo kovová fólie (např. beryliová fólie atd.). Za běžných pracovních podmínek lze požadavky splnit s plastovou fólií, zatímco příprava plastové fólie v ohnivé bavlněné lepicí fólii je relativně snadná, ale pevnost není tak silná jako polyethylenformaldehydová fólie.
