Příprava a pozorování biologických vzorků pro elektronovou mikroskopii
Rozlišení mikroskopu závisí na vlnové délce použitého světla. Elektronový mikroskop, který se začal objevovat v roce 1933, používá jako zdroj světla elektronový paprsek s vlnovou délkou mnohem kratší než má viditelné světlo, takže rozlišení, kterého může dosáhnout, je ve srovnání s optickým mikroskopem výrazně lepší. Rozdíl ve zdrojích světla také určuje řadu rozdílů mezi elektronovými mikroskopy a optickými mikroskopy.
Podle rozdílů v principech zobrazování elektronovým paprskem a různých způsobů působení na vzorky se moderní elektronové mikroskopy vyvinuly do mnoha typů. V současnosti se nejčastěji používají transmisní elektronové mikroskopy a rastrovací elektronové mikroskopy. Celkové zvětšení prvního může být mezi 1000-1000000. Celkové zvětšení posledně jmenovaného se může lišit od 20 do 300,000krát. Tento experiment představuje především přípravu dvou typů mikroskopických vzorků, transmisního elektronového mikroskopu a rastrovacího elektronového mikroskopu.
2. Vybavení
1. Bakterie Escherichia coli (Escherichia coli) šikmá.
2. Roztok nebo činidlo amylacetát, koncentrovaná kyselina sírová, absolutní ethanol, sterilní voda, 2% vodný roztok fosfowolframanu sodného (pH 6.5-8.0), 0,3% polyethylen roztok formaldehydu (rozpustný v chloroformu), buňky Pigment c, octan amonný, plazmid pBR322.
3. Nástroje nebo jiné náčiní: běžný optický mikroskop, měděná síťka, porcelánová nálevka, kádinka, miska, sterilní kapátko, sterilní pinzeta, špendlíky, sklíčka, počítací deska, vakuový potahovací stroj, sušička kritických bodů atd.
3. Operační kroky
(1) Příprava a pozorování vzorků pro transmisní elektronovou mikroskopii
1. Úprava kovové sítě
Vzorek pro optickou mikroskopii se umístí na podložní sklíčko za účelem pozorování. Avšak v transmisní elektronové mikroskopii, protože elektrony nemohou proniknout skleněnou tabulí, mohou být síťové materiály použity pouze jako nosiče, obvykle nazývané nosné sítě. Nosnou síťovinu lze díky různým materiálům a tvarům rozdělit do mnoha různých specifikací, z nichž nejčastěji používaná je 200-400 síť (počet otvorů) měděná síť. Měděná síťka musí být před použitím ošetřena, aby se odstranila nečistota a zůstala čistá, jinak to ovlivní kvalitu nosné fólie a jasnost fotografií vzorku. Tento experiment používá 400-měděnou síťovinu, se kterou lze zacházet následovně: nejprve ji na několik hodin namočte a vybělte amylacetátem, poté ji několikrát opláchněte destilovanou vodou a poté ji namočte do absolutního etanolu. dehydratace. Pokud ani po výše uvedených metodách není měděná síťka čistá, můžete ji namočit na 1 až 2 minuty do zředěné koncentrované kyseliny sírové (1:1) nebo několik minut povařit v 1% roztoku NaOH, opláchnout destilací několikrát zalijte vodou a poté ji vložte do bezvodého Dehydrátu v ethanolu a odložte stranou.
2. Příprava nosné membrány
Při pozorování vzorků by měla být nosná síť také pokryta vrstvou nestrukturované jednotné fólie, jinak malé vzorky vytečou z otvorů nosné sítě. Tato fólie se obvykle nazývá podpůrná fólie nebo nosná fólie. Nosná fólie by měla být elektronově transparentní a její tloušťka by obecně měla být menší než 20 nm; při dopadu elektronového paprsku by měla mít fólie také určitou mechanickou pevnost pro udržení strukturální stability a dobrou tepelnou vodivost; kromě toho by nosná síť měla být použita v elektronové mikroskopii. Neměla by pod ní být žádná viditelná struktura, žádná chemická reakce s neseným vzorkem a žádná interference s pozorováním vzorku. Jeho tloušťka je obecně asi 15 nm. Nosnou fólií může být plastová fólie (jako je kolodiová fólie, polyetylenová formaldehydová fólie atd.), uhlíková fólie nebo kovová fólie (např. beryliová fólie atd.). Za normálních pracovních podmínek může plastová fólie splňovat požadavky. Mezi plastovými fóliemi se kolódiová fólie připravuje poměrně snadno, ale její pevnost není tak dobrá jako u fólie z polyetylenu a formaldehydu.
