Příprava a pozorování biologických vzorků pro elektronové mikroskopy
Rozlišení mikroskopu závisí na vlnové délce použitého světla. Elektronový mikroskop, který se objevil v roce 1933, dosáhl výrazně vyššího rozlišení než optický mikroskop díky použití elektronových paprsků s vlnovými délkami mnohem kratšími než viditelné světlo jako světelných zdrojů. Různé světelné zdroje také určují řadu rozdílů mezi elektronovými mikroskopy a optickými mikroskopy.
Na základě rozdílů v principech zobrazování elektronovým paprskem a způsobech jejich působení na vzorky se moderní elektronové mikroskopy vyvinuly do mnoha typů. V současnosti se nejčastěji používají transmisní elektronové mikroskopy a rastrovací elektronové mikroskopy. První má celkové zvětšení, které se může lišit mezi 1000-10000000krát, zatímco druhé má celkové zvětšení, které se může lišit mezi 20-300000krát. Tento experiment představuje především přípravu dvou typů mikroskopických vzorků, transmisní elektronovou mikroskopii a rastrovací elektronovou mikroskopii.
2, Vybavení
1. Kmen Escherichia coli je nakloněný.
2. Roztok nebo činidlo: pentylacetát, koncentrovaná kyselina sírová, bezvodý ethanol, sterilní voda, 2% vodný roztok fosfowolframanu sodného (pH 6,5-8,0), roztok 0,3% polyvinylformaldehydu (rozpuštěný v chloroformu), cytochrom c, octan amonný, plazmid pBR322.
3. Mezi nástroje nebo jiné nástroje patří běžné optické mikroskopy, měděné sítě, porcelánové nálevky, kádinky, Petriho misky, sterilní kapátka, sterilní pinzety, špendlíky, sklíčka, počítací destičky, vakuové nanášecí stroje, sušičky kritických bodů atd.
3, Operační kroky
(1) Příprava a pozorování vzorků pro transmisní elektronovou mikroskopii
1. Úprava kovové sítě
Vzorek optického mikroskopu se umístí na podložní sklíčko k pozorování. Avšak v transmisním zrcadle, protože elektrony nemohou proniknout skleněnou tabulí, může být jako nosič použit pouze síťový materiál, běžně označovaný jako nosná síť. Nosné pletivo lze rozdělit do různých specifikací díky různým materiálům a tvarům, mezi nimiž se běžně používá měděné pletivo s 200-400 oky (počet otvorů). Měděná síťovina by měla být před použitím ošetřena, aby se odstranila jakákoliv nečistota a zůstala čistá, jinak to ovlivní kvalitu nosné fólie a jasnost fotografií. Měděné síto o velikosti 400 mesh použité v tomto experimentu lze zpracovat následujícím způsobem: nejprve namočte a nechejte plavat v pentylacetátu po dobu několika hodin, poté několikrát opláchněte destilovanou vodou a nakonec měděné pletivo ponořte a nechejte plavat v bezvodém ethanolu za účelem dehydratace. Pokud měděná síť po výše uvedených metodách stále není čistá, může být namočena ve zředěné koncentrované kyselině sírové (1:1) po dobu 1-2 minut nebo vařit v 1% roztoku NaOH po dobu několika minut, několikrát opláchnuta destilovanou vodou a poté dehydratována v bezvodém etanolu pro pozdější použití.
