PH metr - Stanovení a úprava pH média
Na všechny mikroorganismy má vliv pH prostředí, ve kterém žijí. Přítomnost selektivních druhů často zužuje rozsah pH, ve kterém rostou. Někdy může kyselost nebo zásaditost média také působit jako růstový selekční faktor. Pro biochemická testovací média je však rozsah pH, ve kterém mikroorganismy vykazují aktivitu tk v substrátu, užší než rozsah pH požadovaný pro růst: proto je důležité upravit pH média na očekávaný rozsah. Když laboratoř připravuje médium podle složení média, je třeba zkontrolovat a upravit pH. Je třeba upozornit, že i u hotového syntetického dehydratovaného média poskytnutého výrobcem (zejména u některých zásobních dehydratovaných médií) je třeba změřit konečné pH po vyrobení experimentálního média.
Nejpřesnějším způsobem měření pH média je pH metr. Před použitím musí být kalibrován standardním roztokem pufru o známém pH (obvykle je pH 4 až 7). Opláchněte elektrodu pH metru destilovanou vodou a ponořte ji do kultivačního média v kádince a poté odečtěte pH kultivačního média ze stupnice pH metru. Každý výrobce poskytuje podrobné provozní pokyny pro každý typ pH metru.
Při přípravě kultivačního média lze PH snadno upravit pomocí pH metru s mechanickým mícháním. Kultivační médium by mělo být připraveno v nádobě (jako je velká kádinka), kterou lze nepřetržitě míchat. nebo magnety obalené teflonem. Po rozmrazení je třeba upravit pH média obsahujícího agar, což lze snadno provést pomocí vyhřívaného magnetického míchadla. Při nastavování pH použijte ke kalibraci pH metru standardní roztok pufru o známém pH. Poté vložte kompozitní elektrodu a odporový teploměr (pokud existuje) do média, pomalu přidávejte přiměřené množství kyseliny chlorovodíkové a hydroxidu sodného z konce kádinky směrem od elektrody, aby médium dosáhlo a udrželo požadované pH.
Teplotní kompenzace pH metru by měla brát v úvahu vliv teploty na elektrodový systém: v některých ředěních a médiích se pH výrazně mění s teplotou. U kapalných médií a ředění lze pH obvykle upravit a měřit buď při 25 stupních nebo při teplotě, při které se používají.
pH agarového média musí být upraveno po rozpuštění a teplota rozpouštění je vyšší než 45 stupňů: proto by pH pevného média mělo být stanoveno při jeho použití. V tomto okamžiku by měla být použita kompozitní elektroda s plochou hlavou a teplotní kompenzace pH metru by měla být ručně zkalibrována. Pokud se při přípravě kultivačního média zjistí, že pH kultivačního média je rozdílné mezi stavem tání a stavem tuhnutí, znamená to, že došlo k chybě v úpravě pH.
Podobně, když je připravené médium tepelně sterilizováno (např. autoklávováno), může také podléhat změnám pH. U dehydratovaného média to výrobce vzal v úvahu a obvykle není potřeba upravovat pH, ale pH použitého média je třeba pečlivě zkontrolovat. Pokud musí být pH dehydratovaného agarového média upraveno během opětovného rozpouštění nebo přípravy, je nejlepší jej upravit filtračně sterilizovanou kyselinou chlorovodíkovou a roztokem hydroxidu sodného po kroku sterilizace, aby nedošlo k přehřátí média. Při přípravě médií s různými surovinami nebo léčivy je třeba po autoklávování zkontrolovat pH médií. Kromě toho, pokud se zjistí, že se pH média mění po každém autoklávu, může být pH vhodně upraveno při přípravě média. Stále je však nutné stanovit konečné pH média po sterilizaci.
