Metody přípravy vzorků pro optickou a elektronovou mikroskopii filmů
Metoda mikrofilmování obecně zahrnuje čtyři kategorie: metodu krájení, metodu celkového uzavření, metodu potahování a metodu lisování.
① Metoda plátků. Tloušťka řezu optického mikroskopu mezi 2 až 25 mikrony, obecně rostlinné a živočišné materiály, vhodná je tloušťka řezu asi 10 mikronů. Metoda krájení se liší podle různých zalévacích činidel. Běžně se používá parafínová metoda krájení, metoda krájení bavlněným lepidlem, metoda zmrazeného krájení a metoda glykolmethakrylátu (označovaná jako metoda GMA). Metoda parafínového krájení zahrnuje kroky fixace, zapuštění, krájení, barvení, dehydratace a utěsnění. Klíčem je vložit biomateriál do parafínového vosku a použít parafínový vosk jako podporu pro řezání biomateriálu ponořeného do voskového bloku na ideální tenké plátky. Operační proces je následující: fixace → mytí vodou → postupná dehydratace alkoholu od nízké k vysoké koncentraci → průhlednost xylenu → ponoření do vosku → zalití → krájení → záplatování → xylenové odparafinování → krok za krokem od vysoké k nízké koncentraci úprava alkoholem a nakonec přechod na vodu → barvení → postupná dehydratace alkoholem o nízké po vysokou koncentraci → průhlednost xylenu → utěsnění pryskyřičným lepidlem. Základní kroky jsou stejné ve všech druzích filmových technik.
② Integrální metoda těsnění. Používá se pro jednotlivé buňky, drobné organismy nebo rozptýlené orgány celé metody připevněného filmu. Tato metoda také vyžaduje různé kroky fixace, barvení, dehydratace, průhlednosti a těsnění. Tato metoda se používá pro preparaci ústních ústrojí blanokřídlých a hmyzu.
Metoda rozmazání. Způsob přípravy, při kterém se snadno dispergovatelný biologický vzorek nanese na sklíčko. Krevní nátěr je příkladem.
④ Metoda lisování. Přirozené, snadno dispergovatelné tkáně nebo snadno dispergovatelné tkáně po ošetření, jako jsou zvířecí spermatocyty, buňky kořenových špiček atd. na podložním sklíčku, plus krycí sklíčko, a poté násilně rozdrtit tkáně tak, aby se buňky nebo intracelulární struktury rozšířily do vrstvy metod natáčení. Tisková metoda se často používá k pozorování chromozomů, obvykle obarvených octanem purpurovým, lišejníkovou červení a červení kyseliny karbolové.
