Vylepšené výhody laserové skenovací multifotonové mikroskopie
Laserový rastrovací multifotonový mikroskop je významným vylepšením optické mikroskopie, projevující se především schopností pozorovat hluboké struktury živých buněk, fixovaných buněk a tkání a získat jasné a ostré vícevrstvé struktury v Z-rovině, konkrétně optické řezy, které mohou použít ke konstrukci trojrozměrných pevných struktur vzorků. Konfokální mikroskop využívá zdroj laserového světla, který je rozšířen tak, aby vyplnil celou ohniskovou rovinu čočky objektivu, a poté se sbíhá do velmi malých bodů v ohniskové rovině preparátu prostřednictvím čočkového systému čočky objektivu. Podle numerické apertury čočky objektivu je průměr jasného osvětlovacího bodu asi 0.25-0,8 μm a hloubka je asi 0.{{7} },5 μm. Velikost konfokálního bodu je určena konstrukcí mikroskopu, vlnovou délkou laseru, charakteristikami objektivu, nastavením stavu skenovací jednotky a vlastnostmi vzorku. Rozsah osvětlení a hloubka pole mikroskopu jsou velké, zatímco osvětlení konfokálního mikroskopu je zaostřeno na ohnisko v ohniskové rovině. Základní výhodou konfokální mikroskopie je, že dokáže provádět jemné optické řezy na silných fluorescenčních vzorcích (až 50 μm nebo více), o tloušťce přibližně 0,5 až 1,5 μm. Sérii obrazů optických řezů lze získat pohybem preparátu nahoru a dolů pomocí krokového motoru v ose Z mikroskopu. Shromažďování obrazových informací je řízeno v rovině * * bez rušení signálů vyzařovaných z jiných pozic na vzorku. Po odstranění vlivu fluorescence pozadí a zvýšení poměru signálu k šumu se kontrast a rozlišení konfokálních obrazů výrazně zlepšily ve srovnání s tradičními fluorescenčními obrazy osvětlení pole. V mnoha exemplářích se složité konstrukční komponenty prolínají a vytvářejí složité systémy, ale jakmile se podaří shromáždit dostatek optických řezů, můžeme použít software k jejich rekonstrukci ve třech rozměrech. Tato experimentální metoda byla široce používána v biologickém výzkumu k objasnění složitých strukturních a funkčních vztahů mezi buňkami nebo tkáněmi.
