Úvod do výhod a nevýhod multifotonového laserového rastrovacího mikroskopu
Výhody multifotonové laserové skenovací mikroskopie:
1. Při buzení červeným světlem nebo infračerveným světlem je rozptyl světla malý a rozptyl malých částic je nepřímo úměrný čtvrté mocnině vlnové délky.
2. Více rozptýlených fotonů ze zobrazovací sekce lze shromáždit bez dírek.
3. Dírka nedokáže rozlišit rozptýlené fotony emitované z oblasti mimo zaostření nebo oblasti zaostření a poměr signálu k šumu u vícefotonového zobrazování v hlubokých vrstvách je dobrý.
4. Ultrafialové nebo viditelné světlo používané pro jednofotonovou excitaci je snadno absorbováno a zeslabeno vzorkem předtím, než paprsek dosáhne ohniskové roviny, a není snadné excitovat hluboké vrstvy.
5. Z hlediska pozorování biologickým mikroskopem je na prvním místě nepoškodit aktivní stav samotného organismu a zachovat cirkulaci vody, koncentraci iontů, kyslíku a živin. V případě pozorování světlem musí tepelná i fotonová energie zůstat v rozsahu ozáření a světelné energie, která nepoškodí buňky.
6. Multifotonová mikroskopie má mnoho výhod. Jako je trojrozměrné rozlišení, hluboká penetrace, účinnost rozptylu, pozadí světla, odstup signálu od šumu, ovládání atd., všechny mají vlastnosti, které předchozí laserové mikroskopy neměly nebo nemohly překonat.
Nevýhody multifotonové laserové skenovací mikroskopie:
1. Pouze pro fluorescenční zobrazování.
2. Pokud vzorek obsahuje chromofory, které absorbují excitační světlo, může být vzorek tepelně poškozen.
3. Rozlišení je mírně sníženo. I když to lze zlepšit současným použitím konfokální clony, signál se ztrácí.
4. Vzhledem k omezení drahých ultrarychlých laserů jsou náklady na multifotonový rastrovací mikroskop relativně vysoké.
