Jak se fluorescenční mikroskopie liší od konfokální laserové mikroskopie
Fluorescenční mikroskop
1. Fluorescenční mikroskop používá ultrafialové světlo jako světelný zdroj k osvětlení kontrolovaného objektu, aby emitoval fluorescenci, a pak pozoruje tvar a umístění objektu pod mikroskopem. Fluorescenční mikroskopie se používá ke studiu absorpce a transportu látek v buňkách, stejně jako distribuce a umístění chemických látek. Některé látky v buňkách, jako je chlorofyl, mohou po ozáření ultrafialovými paprsky fluoreskovat; některé látky samy fluoreskovat nemohou, ale pokud jsou obarveny fluorescenčními barvivy nebo fluorescenčními protilátkami, mohou po ozáření ultrafialovými paprsky fluoreskovat. Fluorescenční mikroskopie je jedním z nástrojů pro kvalitativní a kvantitativní výzkum takových látek.
2. Princip fluorescenčního mikroskopu:
(A) Světelný zdroj: Světelný zdroj vyzařuje světlo různých vlnových délek (od ultrafialového po infračervené).
(B) Světelný zdroj excitačního filtru: propouští světlo specifické vlnové délky, která může způsobit fluorescenci vzorku, a zároveň blokuje světlo, které je pro stimulaci fluorescence nepoužitelné.
(C) Fluorescenční vzorky: Obecně obarvené fluorescenčními pigmenty.
(D) Blokovací filtr: Blokuje excitační světlo, které není absorbováno vzorkem, a selektivně propouští fluorescenci. Některé vlnové délky ve fluorescenci jsou také selektivně přenášeny. Mikroskop, který využívá ultrafialové světlo jako zdroj světla k tomu, aby osvětlený objekt fluoreskoval. Elektronový mikroskop byl poprvé sestaven v roce 1931 v Berlíně v Německu firmou Knorr a Hallowska. Tento mikroskop používá vysokorychlostní elektronový paprsek místo světelného paprsku. Protože vlnová délka toku elektronů je mnohem kratší než vlnová délka světla, může zvětšení elektronového mikroskopu dosáhnout 800,000násobku a minimální limit rozlišení je 0,2 nanometru. Rastrovací elektronový mikroskop, který se začal používat v roce 1963, umožňuje lidem vidět drobné struktury na povrchu předmětů.
3. Rozsah aplikace: Používá se ke zvětšení obrázků malých objektů. Obecně se používá při pozorování biologie, medicíny, mikroskopických částic atd.
konfokální mikroskop
1. Konfokální mikroskop přidává k optické dráze odraženého světla semireflexní poločočku, která láme odražené světlo prošlé čočkou do jiných směrů. V ohnisku je přepážka s dírkou a dírka se nachází V ohnisku za přepážkou je trubice fotonásobiče. Lze si představit, že odražené světlo před a po detekčním světelném ohnisku prochází tímto konfokálním systémem a nemůže být zaostřeno na malý otvor a bude blokováno přepážkou. Co tedy fotometr měří, je intenzita odraženého světla v ohnisku.
2. Princip: Tradiční optické mikroskopy používají polní světelné zdroje a obraz každého bodu na preparátu bude rušen difrakcí nebo rozptýleným světlem ze sousedních bodů; laserové skenovací konfokální mikroskopy používají laserové paprsky k vytvoření bodových světelných zdrojů prostřednictvím osvětlovacích dírek pro osvětlení vnitřku vzorku. Každý bod ohniskové roviny je naskenován a osvětlený bod na vzorku je zobrazen v detekční dírce, která je přijímána bod po bodu nebo řádek po řádku trubicí fotonásobiče (PMT) nebo studeným spojovacím zařízením (cCCD) za detekcí. dírkou a rychle se vytvoří fluorescenční obraz na obrazovce monitoru počítače. Osvětlovací dírka a detekční dírka jsou konjugované vzhledem k ohniskové rovině čočky objektivu. Body na ohniskové rovině jsou zaostřeny na osvětlovací a emisní dírku současně. Body mimo ohniskovou rovinu nebudou v detekční dírce zobrazeny. To je získáno Konfokální obrazy jsou optické průřezy vzorků, které překonávají nedostatky rozmazaných obrazů v běžných mikroskopech.
3. Oblasti použití: Medicína, vědecký výzkum zvířat a rostlin, biochemie, bakteriologie, buněčná biologie, tkáňová embryologie, potravinářství, genetika, farmakologie, fyziologie, optika, patologie, botanika, neurověda, mořská biologie a věda o materiálech, elektronická věda , mechanika, ropná geologie, mineralogie.
