Fluorescenční mikroskopy jsou rozděleny do dvou typů na základě jejich optických drah:
1. Transmisní fluorescenční mikroskop: Zdroj excitačního světla se používá k vybuzení fluorescence průchodem materiálem vzorku přes kondenzorovou čočku. Lze také použít běžně používané koncentrátory tmavého pole a běžné koncentrátory lze použít k nastavení reflektoru pro přesměrování a postranní laloky excitačního světla na vzorek. Toto je relativně starý-módní fluorescenční mikroskop. Jeho výhodou je silná fluorescence při malém zvětšení, nevýhodou však je, že se zvyšujícím se zvětšením jeho fluorescence klesá. Proto je lepší pro pozorování větších vzorků materiálů.
2. Fluorescenční mikroskop s dopadajícím světlem je nový typ fluorescenčního mikroskopu vyvinutý v moderní době. Na rozdíl od výše uvedeného dopadá excitační světlo z čočky objektivu dolů na povrch preparátu, přičemž se používá stejná čočka objektivu jako osvětlovací kondenzor a čočka objektivu pro sběr fluorescence. K optické dráze, která je od světelného uranu vzdálená 45 stupňů, je třeba přidat dvoubarevný dělič paprsků. Úhel, excitační světlo se odráží do čočky objektivu a zaostřuje na vzorek. Fluorescence generovaná vzorkem, stejně jako excitační světlo odražené od povrchu čočky objektivu a krycího skla, vstupují do čočky objektivu a vracejí se do dvoubarevného rozdělovače paprsků, kde oddělují excitační světlo a fluorescenci. Zbytkové excitační světlo je pak absorbováno blokovacím filtrem. Pokud se použijí různé kombinace excitačních filtrů/separátorů dvoubarevných paprsků/blokovacích filtrů, mohou splnit potřeby různých produktů fluorescenční reakce. Výhody tohoto fluorescenčního mikroskopu jsou rovnoměrné osvětlení pole, jasné zobrazení a silnější fluorescence s větším zvětšením.
(2) Návod k použití fluorescenčního mikroskopu
1. Zapněte zdroj světla. Ultra-vysokotlaká rtuťová výbojka se musí na několik minut předehřát, aby dosáhla maximálního jasu.
2. Transmisní fluorescenční mikroskopie vyžaduje instalaci požadovaného excitačního filtru mezi zdroj lampy a kondenzor a odpovídající blokovací filtr za čočku objektivu. Fluorescenční mikroskop s dopadajícím světlem potřebuje vložit požadovaný excitační filtr/dvoubarevný dělič paprsků/blokovací filtrový blok do štěrbiny optické dráhy.
3. Pozorujte mikroskopem s nízkým výkonem a upravte střed světelného zdroje podle seřizovacího zařízení různých typů fluorescenčních mikroskopů tak, aby byl umístěn ve středu celého osvětlovacího bodu.
4. Umístěte preparát a zaostřete jej pro pozorování. Při používání je třeba věnovat pozornost: Před instalací filtru nepozorujte přímo očima, aby nedošlo k poškození zraku; Při pozorování vzorků olejovým mikroskopem je nutné použít speciální nefluorescenční olejový mikroskop; Poté, co se vysokotlaká rtuťová výbojka vypne, nelze ji okamžitě znovu zapnout. Restartování trvá 5 minut, jinak bude nestabilní a ovlivní životnost rtuťové výbojky.
(3) Při pozorování pod fluorescenčním mikroskopem na výukové platformě s použitím filtru modrého fialového světla lze vidět buňky obarvené fluorescenčním barvivem 0,01% akridinově oranžové. Jádro a cytoplazma jsou excitovány, aby produkovaly dvě různé barvy fluorescence (tmavě zelená a oranžová červená).
