Rozdíly a vlastnosti fluorescenčního mikroskopu a běžného optického mikroskopu
Fluorescenční mikroskop a běžný optický mikroskop se liší, k pozorování preparátu se nevede osvětlením běžného světelného zdroje, ale použitím určité vlnové délky světla (obvykle ultrafialové, modrofialové světlo) excitací fluorescenčního materiálu uvnitř preparátu pod mikroskopem, takže fluorescence světelného zdroje fluorescenčního mikroskopu nehraje přímé osvětlení, ale jako druh excitace fluorescenčního materiálu uvnitř preparátu zdroje energie. Důvod, proč můžeme pozorovat vzorek, není způsoben osvětlením světelného zdroje, ale fluorescenčním jevem prezentovaným fluorescenčním materiálem ve vzorku po absorpci světelné energie excitace. Je vidět, že vlastnosti fluorescenčního mikroskopu, zejména jeho světelný zdroj, mohou dodávat velké množství specifických vlnových délek excitačního světla, takže fluorescenční materiál ve zkoumaném vzorku může získat potřebnou intenzitu excitačního světla. Zároveň musí mít fluorescenční mikroskop odpovídající filtrační systém. Fluorescenční mikroskop je základním nástrojem fluorescenční histochemie. Skládá se z ultra-vysokotlakého světelného zdroje, filtračního systému (včetně excitační a potlačovací filtrační desky), optického systému a fotografického systému a dalších hlavních komponent, je použití určité vlnové délky světla ke stimulaci vzorku k emitování fluorescence.
1. způsob fluorescenční excitace: podle rozsahu vlnových délek světla se dělí na UV excitační metodu (využívá ultrafialové osvětlení) a BV excitační metodu (využívající modrofialové světlo) dva druhy UV excitační metody je kratší než 400nm v blízkosti ultrafialového světla pro excitace. V této metodě není žádné viditelné excitační světlo, takže pozorovaná fluorescence ukazuje vlastní fluorescenci barviva a je snadné odlišit specifickou fluorescenci na vzorku od vlastní fluorescence tkáně pozadí.
2. BV excitační metoda: Metoda je zaměřena na 404nm, 434nm od ultrafialového po modré světlo pro excitaci. Tato metoda využívá k ozařování preparátu modré světlo, takže cut-off filtr fluorescenčního pozorovacího systému musí používat filtr, který dokáže zcela blokovat modré světlo a dokáže adekvátně propustit požadovanou zelenou a žlutou fluorescenci. Fluorescenční pigmenty pro fluorescenční protilátkovou metodu. Vzhledem k tomu, že vlnová délka maximální absorpce excitačního světla a vlnová délka maximální emise fluorescence jsou blízko sebe, musí být filtry použité v BV excitační metodě filtry s ostrým ořezem. Tato metoda využívá modré světlo jako excitační světlo, takže absorpční účinnost fluorochromu je vyšší a lze získat jasnější obraz. Nevýhodou je, že fluorescence pod 500 nm není vidět a nad 500 nm je celý obraz žlutý. Ve fluorescenční protilátkové metodě je většina specifity posuzována podle jedinečné barvy fluorochromu, takže nevýhody BV excitační metody popsané výše mají tendenci být extrémně vlivné, když se diskutuje o jemné specificitě.
