Rozdíl mezi fluorescenčním mikroskopem a běžným optickým mikroskopem
Rozdíl mezi fluorescenčním mikroskopem a běžným optickým mikroskopem, fluorescenčním mikroskopem a běžným optickým mikroskopem se liší, pozorování preparátu se neprovádí osvětlením běžného světelného zdroje, ale použitím určité vlnové délky světla (obvykle ultrafialového, modrofialového) excitace preparátu pod mikroskopem ve fluorescenčním materiálu tak, že vyzařuje fluorescenční světlo, takže role fluorescenčního mikroskopu ve světelném zdroji není přímé osvětlení, ale jako druh stimulace preparátů fluorescence vnitřního světla. Zdrojem fluorescenčního mikroskopu není přímé osvětlení, ale jako zdroj energie pro stimulaci fluorescenční látky uvnitř vzorku. Důvod, proč můžeme pozorovat vzorek, není způsoben osvětlením světelného zdroje, ale fluorescenčním jevem prezentovaným fluorescenční látkou ve vzorku po absorpci excitované světelné energie. Je vidět, že vlastnosti fluorescenčního mikroskopu spočívají především v tom, že jeho světelný zdroj může dodávat velké množství specifického rozsahu vlnových délek excitačního světla, takže fluorescenční látky ve zkoumaném vzorku mohou získat potřebnou intenzitu excitačního světla. Zároveň musí mít fluorescenční mikroskop odpovídající filtrační systém. Fluorescenční mikroskop je základním nástrojem pro **fluorescenční histochemii. Skládá se z ultra-vysokotlakého světelného zdroje, filtračního systému (včetně excitační a potlačovací filtrační desky), optického systému a fotografického systému a dalších hlavních komponent, je použití určité vlnové délky světla ke stimulaci vzorku k emitování fluorescence.
1. způsob fluorescenční excitace: podle rozsahu vlnových délek světla se dělí na UV excitační metodu (využívá ultrafialové osvětlení) a BV excitační metodu (využívající modrofialové světlo) dva druhy UV excitační metody je kratší než 400nm v blízkosti ultrafialového světla pro excitace. V této metodě není žádné viditelné excitační světlo, takže pozorovaná fluorescence ukazuje vlastní fluorescenci barviva a je snadné odlišit specifickou fluorescenci na vzorku od vlastní fluorescence tkáně pozadí.
2. BV excitační metoda: Metoda je zaměřena na 404nm, 434nm od ultrafialového po modré světlo pro excitaci. Tato metoda využívá k ozařování preparátu modré světlo, takže cut-off filtr fluorescenčního pozorovacího systému musí používat filtr, který dokáže zcela blokovat modré světlo a plně propustit požadovanou zelenou a žlutou fluorescenci. Fluorescenční pigmenty pro fluorescenční protilátkovou metodu. Vzhledem k tomu, že vlnová délka maximální absorpce excitačního světla a vlnová délka maximální emise fluorescence jsou blízko sebe, musí být filtry použité v BV excitační metodě filtry s ostrým ořezem. Tato metoda využívá modré světlo jako excitační světlo, takže absorpční účinnost fluorochromu je vyšší a lze získat jasnější obraz. Nevýhodou je, že fluorescence pod 500 nm není vidět a nad 500 nm je celý obraz žlutý. Ve fluorescenční protilátkové metodě je většina specificity posuzována podle barvy jedinečné pro fluorochrom, takže nevýhody BV excitační metody popsané výše mají tendenci být extrémně vlivné, když se diskutuje o jemné specificitě.
