Stanovení počtu mikroorganismů-Mikroskopická metoda přímého počítání!
Růst bakteriální populace se projevuje zvýšením počtu buněk nebo zvýšením buněčného materiálu. Metody pro stanovení počtu buněk zahrnují přímé mikroskopické počítání, počítání na destičkách, odhad zákalu spektrofotometrem, nejpravděpodobnější počet MPN a membránovou filtraci. (membránová filtrace) atd. Metody měření buněčných látek zahrnují stanovení sušiny buněk, stanovení určitých buněčných složek, jako je obsah dusíku, obsah RNA a DNA, a stanovení produktů metabolitů. Stručně řečeno, existuje mnoho metod měření mikrobiálního růstu, z nichž každá má své výhody a nevýhody. Metoda by měla být zvolena podle konkrétních požadavků práce. Tento experiment představuje především metodu přímého počítání mikroskopem, která se běžně používá ve výrobě a vědeckovýzkumné práci.
1. Účelové požadavky
1. Objasněte princip počítání s tabulkou na počítání krvinek.
2. Osvojit si metodu počítání mikroorganismů pomocí destičky na počítání krvinek.
2. Základní principy
Mikroskopická metoda přímého počítání je jednoduchá, rychlá a intuitivní metoda, která umístí malé množství suspenze testovaného vzorku na speciální sklíčko se stanovenou plochou a objemem (také nazývané bakteriometr) a spočítá je přímo pod mikroskopem. Metody. Mezi běžně používané bakteriometry doma i v zahraničí patří v současnosti: hemocytometr, Peteroff-Hauserův bakteriometr, Hawksleyův bakteriometr atd. Všechny lze použít k počítání kvasinek, bakterií, spor plísní a dalších suspenzí a základní principy jsou stejné. Poslední dvě počítadla bakterií mají celkový objem 0.02 mm3 po zakrytí krycím sklem a vzdálenost mezi krycím sklem a sklíčkem je pouze 0,02 mm. Proto lze k pozorování a detekci menších buněk, jako jsou bakterie, použít čočku objektivu s olejovou imerzí. počet. Kromě použití těchto bakteriometrů existuje také metoda odhadu, která přímo pod mikroskopem sleduje poměr plochy nátěru k ploše zorného pole. Tato metoda se obecně používá pro bakteriologické vyšetření mléka. Výhody metody přímého počítání mikroskopu spočívají v tom, že je intuitivní, rychlá a snadno ovladatelná. Nevýhodou této metody však je, že naměřeným výsledkem je většinou součet mrtvých bakterií a živých bakterií. V současné době existují některé metody, jak překonat tento nedostatek, jako je kombinování mikrokomorové kultury s barvením životaschopných bakterií (krátká doba) a přidání inhibitorů buněčného dělení, aby se dosáhlo účelu počítání pouze životaschopných bakterií.
Tento experiment používá hemocytometr jako příklad k provádění přímého počítání pod mikroskopem. Informace o použití dalších dvou bakteriometrů naleznete v pokynech jednotlivých výrobců. Přímé počítání pod mikroskopem pomocí hemocytometru je běžně používanou metodou mikrobiálního počítání. Počítací deska je speciální skluzavka se čtyřmi drážkami tvořícími tři plošiny; širší plošina uprostřed je rozdělena na dvě poloviny krátkou horizontální drážkou a na každé straně plošiny je mřížková mřížka. Každá čtvercová síť je rozdělena na devět velkých čtverců a velký čtverec uprostřed je počítací místnost. Struktura desky pro počítání krvinek je znázorněna na obrázku {{0}}. Obecně existují dvě specifikace pro měřítko počítací komory. Jeden je velký čtverec rozdělený na 25 středních čtverců a každý střední čtverec je rozdělen na 16 malých čtverců (obrázek 15-2); druhý je velký čtverec. Čtvercová síť je rozdělena na 16 středních čtverců a každý střední čtverec je rozdělen na 25 malých čtverců. Bez ohledu na to, o jaký druh počítací desky se jedná, na každém velkém čtverci jsou 400 malých polí. Délka strany každého velkého čtverce je lmm, potom plocha každého velkého čtverce je lmm2. Po zakrytí krycího sklíčka je výška mezi krycím sklíčkem a sklíčkem 0,lmm, objem počítací komory je tedy 0,lmm3 (jedna desetitisícina mililitru). Obrázek 15-1 Struktura desky pro počítání krvinek (1) Obrázek 15-2 Struktura desky pro počítání krvinek (2) A. Pohled zepředu; B. Podélný řez; zvětšená čtvercová síť, velký čtverec uprostřed je počítací komora 1. Krvinky Počítací deska; 2. krycí sklíčko; 3. Při počítání v počítací komoře obvykle spočítejte celkový počet bakterií v pěti čtvercích, poté zjistěte průměrnou hodnotu každého čtverce a poté vynásobte 25 nebo 16, abyste získali Celkový počet bakterií ve velkém čtverci se pak převede do celkového počtu bakterií v 1ml bakteriálního roztoku. Předpokládejme, že celkový počet bakterií v pěti středních čtvercích je A a faktor ředění bakteriálního roztoku je B. Pokud se jedná o počítací destičku s 25 středními čtverci, pak celkový počet bakterií v 1 ml bakteriálního roztoku {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (kusy) Stejným způsobem, pokud se jedná o počítací misku se 16 čtverci, celkový počet bakterií v 1 ml bakteriálního roztoku {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (kusy),,
