Aplikace a využití principů fluorescenčního mikroskopu
Principy a strukturální charakteristiky fluorescenčních mikroskopů: Fluorescenční mikroskopy využívají bodový světelný zdroj s vysokou světelnou účinností k vyzařování světla určité vlnové délky (jako je ultrafialové světlo 3650 palců nebo purpurově modré světlo 4200 palců) přes systém barevných filtrů jako excitační světlo. excitovat fluorescenci ve vzorku. Poté, co látka emituje fluorescenci různých barev, je pak pozorována prostřednictvím zvětšení čočky objektivu a okuláru. Tímto způsobem je pod silným kontrastním pozadím, i když je fluorescence velmi slabá, snadno identifikovatelný a má vysokou citlivost. Používá se především pro studium buněčné struktury a funkce a také chemického složení. Základní konstrukce fluorescenčního mikroskopu se skládá z běžného optického mikroskopu a některého příslušenství (jako je zdroj fluorescenčního světla, excitační filtr, dvoubarevný dělič paprsků, blokovací filtr atd.). Fluorescenční světelný zdroj – obecně používá ultravysokotlakou rtuťovou výbojku (50 až 200W), která může vyzařovat světlo různých vlnových délek, ale každá fluorescenční látka má excitační vlnovou délku, která produkuje nejsilnější fluorescenci, takže excitační filtr (obecně existují ultrafialové, fialové, modré a zelené excitační filtry), které propouštějí pouze excitační světlo určité vlnové délky a osvětlují vzorek, zatímco absorbují všechno ostatní světlo. Každá látka je po ozáření excitačním světlem ve velmi krátké době emitována viditelnou fluorescencí s delší vlnovou délkou, než je vlnová délka ozařování. Fluorescence je specifická a je obecně slabší než excitační světlo. Aby bylo možné pozorovat specifickou fluorescenci, je zapotřebí blokovací (nebo potlačující) filtr za čočkou objektivu. Má dvě funkce: jednou je absorbovat a blokovat vstup excitačního světla do okuláru, aby se zabránilo narušení fluorescence a poškození očí; druhý je vybrat a nechat projít specifickou fluorescenci, aby se ukázala specifická fluorescenční barva. Oba filtry musí být vybrány a použity společně.
