Výhody a nevýhody laserové skenovací mikroskopie
Výhody jsou následující:
1. Při buzení červeným nebo infračerveným světlem je rozptyl světla malý (rozptyl malých částic je nepřímo úměrný čtvrté mocnině vlnové délky).
2. Nejsou potřeba dírky, které jsou schopny shromáždit více rozptýlených fotonů ze zobrazovacího průřezu.
3. Dírkové dírky nemohou rozlišit rozptýlené fotony emitované z rozostřených nebo ohniskových oblastí a multifotony mají lepší poměr signálu k šumu při hloubkovém zobrazování.
4. Ultrafialové nebo viditelné světlo použité pro excitaci jednoho fotonu je snadno absorbováno a zeslabeno vzorkem předtím, než paprsek dosáhne ohniskové roviny, což ztěžuje excitaci hlubokých vrstev.
5. Z hlediska pozorování biologickou mikroskopií je prvním hlediskem nepoškodit aktivní stav samotného organismu a zachovat cirkulaci vody, koncentraci iontů, kyslíku a živin. V oblasti pozorování světla musí tepelná i fotonová energie zůstat v rámci dávky ozáření a světelná energie, která nepoškozuje buňky.
6. Multifotonová mikroskopie má také mnoho výhod. Co se týče trojrozměrného rozlišení, hloubkové invaze, účinnosti rozptylu, světla pozadí, poměru signálu k šumu, ovládání atd., laserové mikroskopy mají bezkonkurenční nebo vynikající vlastnosti, které předchozí laserové mikroskopy neměly.
Multifotonová konfokální laserová skenovací mikroskopie byla rozšířena do různých oblastí výzkumu a aplikací, může provádět trojrozměrné nedestruktivní pozorování vzorků v jejich přirozeném stavu a zlepšit rozlišení a poměr signálu k šumu systému. Využitím změn materiálových vlastností po multifotonové excitaci může také dosáhnout trojrozměrného ukládání výškových dat a trojrozměrného mikrozpracování v libovolném směru, což má vysokou aplikační hodnotu. Lze se domnívat, že s dalším vývojem mechanických, materiálových a laserové technologie související s vícefotonovou konfokální mikroskopií, vícefotonová konfokální laserová skenovací mikroskopie bude mít větší rozvoj a širší aplikace
Nevýhody jsou následující:
1. Pouze pro fluorescenční zobrazování.
2. Pokud vzorek obsahuje chromofory, které mohou absorbovat excitační světlo, jako jsou pigmenty, může být vzorek vystaven tepelnému poškození.
3. Rozlišení je mírně sníženo, i když jej lze zlepšit současným použitím konfokálních malých otvorů, dojde ke ztrátě signálu.
4. Vzhledem k omezením drahých ultrarychlých laserů jsou náklady na multifotonové rastrovací mikroskopy relativně vysoké.
