Jaké jsou výhody konfokální laserové mikroskopie
Ve srovnání s tradičními širokoúhlými mikroskopy má laserová skenovací konfokální mikroskopie vlastnosti vysokého rozlišení, vysokého rozlišení a vysoké citlivosti. Je široce používán v oblasti biomedicíny a stal se důležitým zobrazovacím nástrojem v této oblasti. Proč může mít konfokální tolik lásky a jaké výhody to má? Tento článek uvádí tři aspekty k diskusi o výhodách konfokálu.
Signál shromažďujte pouze na ohniskové rovině, aby byl obraz čistý a nerozmazaný
Jak tedy konfokální mikroskopie dosahuje této výhody? To je způsobeno klíčovým konfokálním hardwarem – dírkou, jak je znázorněno na obrázku 2. Je to malá dírka před detektorem a umístěná v optické rovině konjugované s ohniskovou rovinou vzorku. Když excitační světlo ozařuje vzorek, jak ohnisková rovina, tak neohnisková rovina oblasti vzorku budou excitovány za účelem generování fluorescenčních signálů, nastavte vhodnou velikost dírky (obvykle 1 Au), aby fluorescenční signál na ohniskové rovině (zelená tečkovaná čára) mohou být Fluorescenční signály (červené a modré přerušované čáry), které procházejí dírkou, aby dosáhly detektoru mimo ohniskovou rovinu, nemohou dosáhnout detektoru dírkou. Díky přidání hardwarových dírek může konfokál získat jasné a vysoce kvalitní snímky, aniž by se měnil způsob výroby běžných fluorescenčních mikroskopů.
Díky existenci dírky můžeme získat signál pouze v ohniskové rovině a získat dvourozměrný obraz s vysokým rozlišením. Nepřetržitým nastavováním polohy osy Z lze získat dvourozměrné obrazy v různých polohách osy Z a získat řadu kontinuálních obrazů "optických řezů". Po získání těchto optických řezů lze 3D modul vybavený softwarem přístroje použít k rekonstrukci 3D obrazu za účelem vytvoření čistého 3D obrazu. Tato nedestruktivní, nepřetržitá sbírka obrazů optických řezů realizuje funkci "buněčného CT".
Přesnost výsledků kolokalizace úzce souvisí s rozlišením obrazu, proto musíme při provádění kolokalizačních experimentů zvolit zobrazovací metodu s vyšším rozlišením. Ve srovnání s tradičními mikroskopy se konfokální mikroskopie stala silným nástrojem pro výzkum kolokalizace díky svým výhodám s vysokým rozlišením.
Vzhledem k existenci difrakčního limitu je konvenční konfokální optické rozlišení kolem 200 nm. Když potřebujeme pozorovat struktury větší než 200nm, konfokální dokáže přesně určit stupeň kolokalizace. Pokud je vyžadována kolokalizační analýza, lze zvolit modul kolokalizační analýzy vybavený konfokálním softwarem.
