Princip a strukturní charakteristiky fluorescenční mikroskopie
Fluorescenční mikroskopie využívá bod s vysokou světelnou účinností k vyzařování určité vlnové délky světla (jako je ultrafialové světlo 3650 palců nebo fialové modré světlo 4200 palců) přes systém barevného filtrování jako excitační světlo a excituje fluorescenční látky ve vzorku, aby emitovaly různé barvy fluorescence. Poté je pozorován pomocí zvětšení čočky objektivu a okuláru. Tímto způsobem je snadné rozpoznat, i když je fluorescence velmi slabá na silném pozadí, s vysokou citlivostí. Používá se především pro studium buněčné struktury a funkce, stejně jako chemického složení. Základní struktura fluorescenčního mikroskopu se skládá z běžného optického mikroskopu a příslušenství, jako je zdroj fluorescenčního světla, excitační filtr, separátor dichroického paprsku a blokovací filtr. Fluorescenční světelné zdroje obecně používají ultra vysokotlaké rtuťové výbojky (50-200W), které mohou vyzařovat světlo různých vlnových délek. Každá fluorescenční látka má však vlnovou délku excitačního světla, která produkuje nejsilnější fluorescenci, takže je třeba přidat excitační filtry (typicky ultrafialové, fialové, modré a zelené excitační filtry), aby umožnily pronikání a ozařování pouze určité vlnové délky excitačního světla. vzorek, zatímco absorbuje všechno ostatní světlo. Každá látka po ozáření excitačním světlem emituje ve velmi krátké době viditelnou fluorescenci delší, než je vlnová délka ozařování. Fluorescence má specificitu a je obecně slabší než excitační světlo. Aby bylo možné pozorovat specifickou fluorescenci, je nutné přidat blokování (nebo potlačení) za čočkou objektivu a použít ji v kombinaci.
Rozdíl mezi fluorescenčním mikroskopem a běžným mikroskopem
1. Metoda osvětlení je obvykle typu padajícího paprsku, ve kterém je zdroj světla promítán na vzorek přes čočku objektivu;
2. Zdrojem světla je ultrafialové světlo s kratší vlnovou délkou a vyšším rozlišením než běžné mikroskopy;
3. Existují dva speciální filtry, jeden před zdrojem světla se používá k odfiltrování viditelného světla a jeden mezi okulárem a čočkou objektivu se používá k odfiltrování ultrafialových paprsků k ochraně lidského oka.
Fluorescenční mikroskopie je také druh optické mikroskopie, přičemž hlavním rozdílem jsou různé excitační vlnové délky. To určuje rozdíly ve struktuře a použití mezi fluorescenční mikroskopií a běžnou optickou mikroskopií.
Fluorescenční mikroskopie je základním nástrojem imunofluorescenční cytochemie. Skládá se z hlavních komponent, jako je zdroj světla, systém filtračních desek a optický systém. Využívá určitou vlnovou délku světla k vybuzení vzorku, aby emitoval fluorescenci, a zvětšuje jej pomocí čočky objektivu a systému okuláru, aby bylo možné pozorovat fluorescenční obraz vzorku.
