Požadavky na výrobu preparátů fluorescenčního mikroskopu
(1) Podložní sklo
Tloušťka diapozitivu by měla být mezi 0,8 a 1,2 mm. Pokud je podložní sklíčko příliš silné, jednak pohltí více světla a jednak nemůže způsobit shromažďování excitačního světla na preparátu. Podložní sklíčko musí být hladké, jednotné tloušťky a bez zjevné spontánní fluorescence. Někdy jsou potřeba sklíčka z křemenného skla.
(2) Krycí sklíčko
Tloušťka krycího skla je asi 0,17 mm, což je hladké a čisté. Pro zvýšení buzení lze také použít interferenční krycí sklo. Jedná se o speciálně navržené krycí sklo s několika vrstvami látek (např. fluorid hořečnatý), které mají různé interferenční účinky na různých vlnových délkách světla. Může umožnit hladký průchod fluorescence, zatímco excitace odrazem může excitovat vzorek.
(3) Vzorek
Tkáňové plátky nebo jiné preparáty by neměly být příliš silné, protože excitační světlo se většinou spotřebovává ve spodní části preparátu, zatímco horní část přímo pozorovaná čočkou objektivu není plně excitována. Kromě toho může úsudek ovlivnit překrývání buněk nebo maskování nečistot.
(4) Těsnicí prostředek
Glycerin se běžně používá jako montážní činidlo a musí být bez spontánní fluorescence, bezbarvý a průhledný. Jas fluorescence je jasnější při pH 8,5~9,5 a není snadné rychle slábnout. Proto se jako těsnicí prostředek běžně používá stejná směs glycerolu a 0,5 mol/l uhličitanového pufru při pH 9.0-9,5.
（5） Zrcadlový olej
Při pozorování preparátů pomocí fluorescenčního mikroskopu v tmavém poli a olejového mikroskopu je nutné použít olej na čočky. Nejlepší je použít speciálně vyrobený nefluorescenční olej na čočky, který lze také nahradit glycerolem, jak je uvedeno výše. Lze použít i tekutý parafín, ale index lomu je nízký a má mírný vliv na kvalitu obrazu.
Opatření pro použití fluorescenčního mikroskopu
(1) Přísně dodržujte požadavky továrního manuálu fluorescenčního mikroskopu a neměňte program svévolně.
(2) Kontrola by měla být prováděna v temné místnosti. Po vstupu do temné komory připojte napájení a zapalte ultravysokotlakou rtuťovou výbojku po dobu 5 až 15 minut. Poté, co světelný zdroj vydá silné světlo a stabilizuje se, oči se plně přizpůsobí temné komoře, než začnou preparát pozorovat.
(3) Aby se zabránilo poškození očí UV zářením, měli byste při nastavování zdroje světla nosit ochranné brýle.
(4) Doba kontroly by měla být pokaždé 1-2 hodin. Pokud překročí 90 minut, intenzita svítivosti ultravysokotlaké rtuťové výbojky se postupně snižuje a fluorescence slábne; Po vystavení ultrafialovému záření po dobu 3-5 minut se fluorescence vzorku také výrazně snížila; Nemělo by tedy přesáhnout maximálně 2-3 hodin.
(5) Životnost zdroje světla fluorescenčního mikroskopu je omezená a vzorek by měl být kontrolován centrálně, aby se ušetřil čas a ochránil zdroj světla. Když je horké počasí, měl by být přidán elektrický ventilátor, který odvádí teplo a ochladí. Při výměně nové žárovky by se měla doba používání zaznamenat od začátku. Když se lampa vypne a chce ji znovu použít, musí před zapálením počkat, až žárovka úplně vychladne. Vyhněte se vícenásobnému zapálení světelného zdroje.
(6) Pozorujte vzorek ihned po obarvení, protože fluorescence v průběhu času postupně klesá. Pokud je vzorek skladován v polyethylenovém plastovém sáčku při 4 stupních, může to zpozdit dobu zeslabení fluorescence a zabránit odpařování montážního prostředku.
(7) Posuzovací standard pro jas fluorescence je obecně rozdělen do čtyř úrovní, jmenovitě „jedna“ – žádná nebo viditelná slabá fluorescence. plus - Viditelná je pouze jasně viditelná fluorescence. plus plus - Viditelné s jasnou fluorescencí. ' plus plus plus ' - Viditelná a oslnivá fluorescence.
