Požadavky na tloušťku optického mikroskopu pro podložní sklíčka
Mikroskopická dehydratace a přichycení vzorku: V důsledku opakovaného odstřeďování dochází ke ztrátě buněk, proto je nejlepší připevnit buňky na povrch podložního sklíčka nebo plastové fólie pro optickou mikroskopii, aby byly buňky dehydratovány a vysušeny spolu se sklem sklíčko nebo plastová fólie. Požadavky na tloušťku podložních sklíček v optické mikroskopii Aby se buňky mohly přichytit na podložní sklíčka nebo plastové desky, je nutné nejprve položit vrstvu filmu na podložní sklíčka nebo plastové desky. Způsob pokládání fólie je následující:
(1) Nejjednodušší metodou pro optickou mikroskopii je položení tenké vrstvy polyvinylformového (formvarového) filmu. Namočte vyčištěná sklíčka do (0.5-1) procenta polyvinylformalového chloroformového roztoku. Po odpaření atmosféry se na diapozitivech objeví bílý film. Sklíčka několikrát protřepejte v chloroformu, aby se film změnil. Tenký a připravený k použití.
(2) Kápněte poly-L-lysin 0.1 zeměpisné šířky (při přípravě rozpusťte 1 mg poly-lysinu v 1 ml filtrované vody) na vyčištěné podložní sklíčko a po rozvinutí kapky je vložte do zásobní krabičky o teplotě 450 °C. . schnout. Tato metoda je nejlepší, protože poly-L-lysin je kladně nabitý, což umožňuje připojení více povrchově záporně nabitých buněk.
(3) Přidejte plazmu a glycerol do destilované vody v poměru (30--40) procent a (3-5) procent podle požadavků optického mikroskopu na tloušťku sklíčka, aby se vytvořil glycerolový protein řešení. Kapalina se nakape na vyčištěné podložní sklíčko, rozloží a vysuší pod optickým mikroskopem. Položený proteinový film se ponoří do 2% glutaraldehydu, aby se protein zafixoval, promyje se a suší pro pozdější použití. Před použitím se plazma nakape na proteinový film Make it "activated", po 30 minutách opláchněte pufrem a může být aplikována přímo.
Fixované a vyčištěné buňky se pod digitálním mikroskopem upraví na vhodnou koncentraci buněčné suspenze s filtrovanou vodou a optický mikroskop se umístí na podložní sklíčko nebo plastovou fólii, která je pokryta membránou, a umístí se do vlhkého, nízkého teplota (40C) prostředí (30-120) minut, aby se buňky mohly připojit k membráně. Pomocí jemné pinzety sejměte podložní sklíčko a protřepejte je v čisté dvakrát destilované vodě a neulpívající buňky omyjte optickým mikroskopem. Požadavky na tloušťku sklíček v optických mikroskopech Polarizační mikroskopy se pak rychle umístí do nádoby naplněné 50 procenty acetonu (nebo ethanolu). Proces dehydratace spočívá v vkládání sklíček do acetonu nebo ethanolu se zvyšující se koncentrací každé 3 minuty a optickým mikroskopem nebo kontinuálním zvyšováním koncentrace dehydratačního činidla v nádobě na sklíčka. Podle autorových laboratorních zkušeností je výhodnější druhá jmenovaná operace. Specifická metoda optické mikroskopie dokáže každé 3 minuty vysát polovinu dehydratačního činidla z nádoby a poté přidat stejné množství dehydratačního činidla o koncentraci 100 procent. Po 5-6 operacích dosáhne koncentrace dehydratačního činidla v cenové nádobě mikroskopu více než 0,5 procenta a buňky jsou úspěšně dehydratovány. Po zaschnutí v kritickém bodě se podložní sklíčko nebo plastová fólie přilepí vodivým lepidlem pro pokovení na sloupek vzorku. Existují také výhody pro připojení buněk k membránám stanoveným třetím způsobem. Optický mikroskop dokáže zavěsit buňky fixované nízkou koncentrací glutaraldehydu na "aktivovaný" proteinový film. Optický mikroskop vyžaduje, aby tloušťka podložního sklíčka byla umístěna na 10 minut, a podložní sklíčko nebo plastová fólie se namočí ve 2 procentech glutaraldehydu. Po 30 minutách opláchněte filtrovanou dvakrát destilovanou vodou a poté vysušte, vysušte a pokovujte podle výše uvedené metody.
