Zobrazovací metody pro světlá a tmavá pole fluorescenční mikroskopie
(1) Zobrazování ve světlém poli (BFI), které umožňuje pouze vysílaným elektronům v paraxiální oblasti procházet aperturou objektivu a vytvářet tmavý obraz na světlém pozadí. Čím menší je apertura čočky objektivu, tím větší je kontrast obrazu ve světlém poli; (2) Zobrazování v temném poli (DFI), které umožňuje pouze části paprsku rozptýleného pod velkým úhlem nebo difrakčního paprsku krystalu procházet aperturou čočky objektivu a přitom blokovat vysílaný paprsek. To vytváří jasný grafický obraz na tmavém pozadí. Tato metoda zobrazování v tmavém poli může zlepšit kontrast snímků a je důležitou zobrazovací metodou.
Existují zhruba čtyři metody fluorescenční mikroskopie k dosažení zobrazení v tmavém poli: (1) udržování vertikálního osvětlení podél optické osy při pohybu apertury objektivu; (2) Použití šikmého osvětlení k získání rozptýlených paprsků ve směru optické osy se nazývá Center Dark Field Imaging (CDFI); (3) Clona čočky objektivu s centrálním blokováním paprsku a kruhovou průhlednou oblastí; (4) Použijte kruhový průhledný bodový reflektor k detekci světla a aperturu objektivu s centrálním kruhovým otvorem. Zde uvedené metody * jsou jednoduché a pohodlné, ale využívají elektronické zobrazování ve vzdálené oblasti rukávu, což má za následek velké aberace a špatnou kvalitu obrazu. Druhý způsob se může vyhnout výše uvedeným nevýhodám, ale objektiv fluorescenčního mikroskopu Leica přijímá pouze malou část rozptýlených difraktovaných elektronů, což má za následek nižší účinnost. Strana clony je často bombardována velkým množstvím elektronů, které mohou snadno způsobit asymetrické znečištění a ovlivnit kvalitu obrazu. Kruhový objektiv byl v tomto ohledu vylepšen, ale nevýhodou je, že se obtížně vyrábí a je obtížné dosáhnout úplné osové symetrie. Vzhledem k relativně uvolněným požadavkům na osvětlovací systém lze použít posledně uvedené řešení, které zahrnuje přidání kruhového otvoru u kondenzoru pro zajištění dutého osvětlení vzorku. Účinek tohoto zařízení. Jeho rozlišení obrazu se může blížit rozlišení snímků ve světlém poli, zatímco kontrast je výrazně vylepšen.
