Proč je zvětšení olejové čočky větší než u běžné čočky objektivu?
Důvody, proč je třeba bakterie před barvením v mikrobiologických experimentech fixovat:
1: Zabíjí buňky, snadno se barví.
2: Nechte bakterie přilnout na podložní sklíčko a není snadné je smýt vodou.
Při fixaci by se měl pomalu sušit. Pokud chcete opravdu zrychlit, můžete ho párkrát osušit v dálce nad plamenem lihové lampy. Nenechávejte sklíčko zahřát, jinak může zničit životní formu bakterií.
Gramovo barvení a mikroskopické pozorování bakterií
1. Experimentální princip
Princip barvení podle Grama: Bakterie reagují na barvení podle Grama odlišně kvůli složení a struktuře jejich buněčných stěn. Buněčná stěna grampozitivních bakterií je převážně síťový uzel tvořený peptidoglykanem. Při ošetření ethanolem se velikost pórů síťové struktury v důsledku dehydratace zmenšuje a propustnost se snižuje, takže komplex krystalová violeť-jód Látka se snadno eluuje a zadržuje v buňce a modrá- fialová barva primárního barvícího činidla je stále zachována po odbarvení a kontrastním barvení. Peptidoglykanová vrstva buněčné stěny gramnegativních bakterií je tenká a obsah lipidů je vysoký, takže když se provádí odbarvovací ošetření, lipid se rozpustí ethanolem (nebo acetonem) a propustnost buněčné stěny se zvýší, takže že komplex krystalová violeť-jod Je snadněji eluovatelný a po kontrastním barvení kontrastním barvivem jsou buňky obarveny červenou barvou kontrastního barviva. Princip mikroskopického zobrazování: Moderní běžné optické mikroskopy používají ke zvětšení obrazu dva čočkové systémy okuláru a objektivu, proto se často nazývají složené mikroskopy. V optickém systému mikroskopu je výkon čočky objektivu nejkritičtější a zvětšení olejové čočky je největší, což je pro mikrobiologický výzkum nejdůležitější. Hlavním účelem přidání imerzního oleje mezi sklíčko a čočku je zvýšení jasu osvětlení a zvýšení rozlišení mikroskopu. Místo vzduchu se jako médium přenosu světla používá olej, aby se snížil lom nebo úplný odraz světla a byl pozorovaný obraz jasnější.
2. Experimentální zařízení
1. Kolonie:
Escherichia coli 24h živná kultura na šikmém agaru,
Staphylococcus aureus asi 24hodinová kultura na živném agaru, Bacillus subtilis 12-18h kultura na šikmém agaru.
2. Roztoky nebo činidla:
Destilovaná voda, roztok jódu, barvicí roztok křišťálové violeti, 95% alkohol, barvicí roztok safranin, cedrový olej. 3. Nástroj:
Mikroskop, podložní sklíčko, očkovací klička, alkoholová lampa, pinzeta, čočková tkáň.
3. Experimentální kroky
a:
1. Namazat
Vyjměte podložní sklíčko, zapalte podložní sklíčko, vypalte alkohol na podložním sklíčku a sterilizujte jej, doprostřed kápněte malou kapku destilované vody, pomocí očkovací smyčky jemně naberte malé množství bakterií na šikmé médium testu zkumavka, Během celého procesu by ústí zkumavky mělo být nad alkoholovou lampou a rychlost by měla být vysoká, aby se zabránilo kontaminaci kultivačního média. Poté krouživými pohyby roztírejte malé kapičky vody na podložní sklíčko, zastavte, když jsou kapičky vody zakalené, a počkejte, až zaschnou a zafixují se.
2. Primární barvení
Na kolonii kápněte krystalovou violeť (vhodné je pouze překrýt bakteriální film), barvit 1-2 minut, slijte barvicí roztok a opláchněte jemnou vodou z horní části sklíčka, dokud není eluát bezbarvý, a umístěte skvrnu na sklíčko. Na plátky setřeste vodu.
3. Mořidlo
Po kapkách přidejte roztok jódu, aby se smyla zbytková voda, zakryjte asi 1 minutu a opláchněte vodou.
4. Odbarvování
Setřeste vodu na podložním sklíčku, nakloňte podložní sklíčko a přidejte 95% alkohol, aby se odbarvilo pod bílým pozadím, dokud se vytékající alkohol nezdá modrý, ihned alkohol opláchněte vodou a položte podložní sklíčko Protřepejte z vody na plátky.
5. Kontrabarvení
Obarvěte roztokem safraninu po dobu asi 1-2 minut, omyjte vodou a poté osušte savým papírem
6. Mikroskopické vyšetření:
Hledejte bakteriální kolonii, kterou chcete pozorovat pod čočkou s malým zvětšením (pokračujte v pohybu sklíčkem, pokud ucítíte červený stín, okamžitě zastavte, upravte zvětšení, pokud se nejedná o kolonii, pokračujte v hledání), zvedněte tubus objektivu, a poté přepněte na olejové zrcátko. Přidejte kapku cedrového oleje do oblasti vzorku a opatrně spusťte tubus objektivu pomocí hrubého seřizovače tak, aby olejová čočka byla ponořena v oleji a téměř se dotýkala vzorku. Zvedněte kondenzor do nejvyšší polohy a úplně otevřete clonu, pomocí hrubého seřizovacího prvku pomalu zvedněte tubus objektivu, dokud se v zorném poli neobjeví obraz předmětu, a pomocí jemného ovladače jej zjasněte a zaostřete.
