Jaké specifikace vzorků jsou potřebné pro světelnou mikroskopii?
V procesu přípravy vzorku optického mikroskopu je tloušťka řezu vzorku mezi 2-25 um; tloušťka řezu elektronového mikroskopu je do 50-100 nm (s výjimkou vysokonapěťového elektronového mikroskopu, jehož tloušťka vzorku může dosáhnout 1 um), takže použitá metoda řezu není vždy stejná.
Nosičem řezu optického mikroskopu je sklíčko, nosičem řezu elektronového mikroskopu je mřížka.
Z hlediska fixace jsou plátky optického mikroskopu fixovány složeným fixativem, zatímco plátky elektronového mikroskopu jsou fixovány opakovaně jediným fixativem.
Z hlediska barvení je barvení optických vzorků poměrně jednoduché. Podle různých pozorovacích vzorků a typů optických mikroskopů obvykle stačí obarvit některými fixními barvícími prostředky. Existuje mnoho a komplikovaných metod pro opětovné barvení vzorků elektronového mikroskopu, jako je negativní barvení, barvení stříbrem a tak dále.
Z hlediska zalévání se jako zalévací prostředky pro řezy optických mikroskopů používají parafín, kolodium, želatina atd.; epoxidová pryskyřice, polystyrenová pryskyřice, isobutylenová pryskyřice a ve vodě rozpustná pryskyřice se používají jako zalévací činidla pro řezy elektronového mikroskopu.
Aby bylo zajištěno, že zorné pole mikroskopu může být rovnoměrně a plně osvětleno, musí být při první instalaci a odladění mikroskopu nastaven optický systém osvětlení. Je to důležitý prostředek a nejzákladnější způsob, jak správně používat mikroskop a získat správné a spolehlivé výsledky. požadavky. Správné zvládnutí seřízení systému optické dráhy osvětlení je navíc nezbytným krokem po výměně žárovky světelného zdroje během používání mikroskopu a také nezbytným prostředkem pro občasnou kontrolu výkonu mikroskopu během každodenního používání. použití. Nastavení systému optické dráhy osvětlení mikroskopu zahrnuje především následující čtyři položky: 1. Předběžné nastavení komory lampy zdroje světla vně mikroskopu ① Nejprve otevřete pouzdro komory lampy, stisknutím pružinové spony vložte halogenovou žárovku do lampy. patici a vyhněte se přímému kontaktu s žárovkou prsty během instalace (lze oddělit měkkým hadříkem nebo papírem), aby se zabránilo Na žárovce jsou otisky prstů a jiné nečistoty, které ovlivní životnost žárovky. ②Postavte lampu na stůl, po zapnutí napájení pomocí speciálního šroubováku upravte otvor pro zaostřovací knoflík lampy (označený „←→“) tak, aby se vlákno promítalo na zeď 1-2 m daleko a obraz vlákna je upraven. Poté nastavte výšku lampy a upravte otvor pro závit (označený "──") tak, aby byla poloha vlákna vhodná; poté upravte levou a pravou polohu žárovky, abyste upravili otvor pro šroub (označený „──“) tak, aby byla levá a pravá poloha vlákna vhodná.
2. Účelem kontroly a korekce polohy osvětlovacího prostředku (vlákna) zdroje světla v mikroskopu je upravit obrazový konec osvětlovacího prostředku kolmo do zorného pole čočky objektivu a zajistit, aby zorné pole mikroskop je plně a rovnoměrně osvětlen z perspektivy světelného zdroje. Osvětlení, které je předpokladem pro seřízení osvětlovací soustavy Kuhler. Potřebné základní nástroje: Centrovací dalekohled je vybaven při zakoupení mikroskopu. ① Odpojte pouzdro z matného skla v krytu lampy a vložte kryt lampy zpět na mikroskop. ② Vyberte čočku objektivu 10×, zapněte program světelného zdroje, abyste našli vzorek a jasně jej zaostřili, a poté použijte čočku objektivu 40× k jasnému zaostření vzorku (čočka objektivu 40× Můžete vidět celý obrázek vlákna ); ③ Otevřete aperturní clonu a polní clonu kondenzoru na maximum; ④ Odpojte jeden z okulárů, nahraďte je centrovacím dalekohledem, uchopte bílou část, druhou rukou natáhněte černý okulár. V zorném poli vidíte obraz vlákna; ⑤ Pokud poloha vlákna není vhodná, upravte otvor „──“ pro úpravu obrazu vlákna v horizontálním směru a úpravou otvoru „──“ upravte obraz vlákna ve vertikálním směru, dokud neupravte obraz vlákna na světelný kruhový obraz, který právě vyplňuje otvor objektivu; ⑥ Po nastavení vložte objímku z matného skla zpět do původní polohy, odpojte centrovací dalekohled a vyměňte okulár pro další nastavení. Výše uvedené seřízení osvětlovací komory světelného zdroje mimo mikroskop a ověření polohy světelného tělesa světelného zdroje uvnitř mikroskopu je nutné provést pouze při první instalaci a odladění mikroskopu a při výměně žárovky a mikroskop nelze při použití mikroskopu nastavit náhodně. V případě záměny jej lze upravit zpět do původního stavu dle výše uvedených kroků.
3. Správné nastavení osvětlovacího systému Kohler Jedním z hlavních úkolů správného seřízení mikroskopu je seřízení systému optické dráhy osvětlení a klíčové je seřízení osvětlovacího systému Kohler. Každý člověk, který používá mikroskop, zejména ti, kteří provádějí mikrofotografie, by měl mít určité pochopení a zvládnutí principu osvětlovacího systému Kuhler a jeho kroků nastavení, aby mohl plně hrát funkce mikroskopu a fotografovat. Fotografie, které vyjdou, mohou být konzistentnější a dokonalejší. Princip osvětlovacího systému Kohler je jednoduchý: světlo vyzařované kterýmkoli bodem osvětlovače světelného zdroje může osvětlit zorné pole mikroskopu a světlo vyzařované každým bodem osvětlovače světelného zdroje je shromažďováno a v poli pohledu mikroskopu Je dosaženo velmi plného a rovnoměrného osvětlení. Účelem seřízení osvětlovací soustavy Kuhler je získat rovnoměrné a dostatečné osvětlení pro pozorované zorné pole a zabránit tomu, aby rozptylové světlo ovlivňovalo nebo rušilo zobrazovací systém, aby nedocházelo k zamlžování filmu při fotografování. Nezbytné součásti pro vysoce nastavitelný osvětlovací systém Kohler: clona pole, systém kondenzorových čoček, který lze nastavit na ose. ① Vyberte 10× čočku objektivu a 10× okulár ② Vložte přední čočku kondenzoru do optické dráhy, nastavte aperturní clonu do střední polohy (ne příliš velkou nebo malou) a poté zvedněte kondenzor do horní polohu a nastavte otočný talíř kondenzoru do polohy Jasné pole "J" ③ Nastavte clonu pole na minimum (0,1)
④ Umístěte uzavřený biologický vzorek na stolek, zapněte zdroj světla a zřetelně zaostřete
⑤ V zorném poli bude částečně osvětlená oblast nebo světlý bod, což je rozmazaný obraz clony pole, ve kterém jsou jasně vidět detaily vzorku; mimo něj je tmavší zorné pole, které nemusí nutně vidět detaily vzorku jasně
⑥Upravte mírně kondenzor směrem dolů, aby se světlý bod v zorném poli postupně zmenšil a postupně se stal jasným polygonálním obrazem, což je jasný obraz clony pole;
⑦Obecně platí, že polygonální obraz není ve středu zorného pole a je nutné nastavit dvojici centrovacích šroubů kondenzoru pro nastavení polygonálního obrazu clony pole do středové polohy;
⑧Postupně otevírejte clonu zorného pole, aby se polygonový obraz stal vepsaným polygonem zorného pole, a dále zkontrolujte stav zarovnání. Pokud vyrovnání není ideální, pokračujte v jemném dolaďování vyrovnávacího šroubu;
⑨Pootevřete clonu zorného pole tak, aby její polygonální obraz zmizel na okraji zorného pole. Zatím je dokončena úprava osvětlovacího systému Kohler. Po nastavení systému osvětlení Kohler je celé zorné pole rovnoměrně osvětleno a pořízené mikrofotografie jsou jasné a jasné s normálním kontrastem.
