Jaké jsou požadavky na vzorky pro světelnou mikroskopii?
V procesu přípravy vzorku optického mikroskopu je tloušťka řezu vzorku mezi 2 a 25 um; tloušťka plátku elektronového mikroskopu je do 50-100nm (s výjimkou vysokonapěťového elektronového mikroskopu může tloušťka vzorku dosáhnout 1 um), takže použitá metoda krájení není vždy stejná.
Z hlediska nosiče je nosičem sekce optického mikroskopu podložní sklíčko a nosičem sekce elektronového mikroskopu je nosná mřížka.
Z hlediska fixace jsou řezy optického mikroskopu fixovány složeným fixativem, zatímco řezy elektronového mikroskopu jsou opakovaně fixovány jediným fixativem
Z hlediska barvení je barvení optických vzorků poměrně jednoduché. Podle různých pozorovacích vzorků a typu optického mikroskopu obvykle stačí použít nějaké fixní skvrny. Existuje mnoho metod pro opětovné barvení vzorků elektronového mikroskopu a jsou také velmi komplikované, jako je negativní barvení, barvení stříbrem a tak dále.
Z hlediska zalévání se jako zalévací prostředky pro řezy optických mikroskopů používají parafín, kolodium, želatina atd.; epoxidová pryskyřice, polystyrenová pryskyřice, isobutylenová pryskyřice a ve vodě rozpustná pryskyřice se používají jako zalévací činidla pro řezy elektronového mikroskopu.
Aby bylo zorné pole mikroskopu osvětleno rovnoměrně a dostatečně, je nutné při první instalaci a odladění mikroskopu upravit systém optické dráhy osvětlení. požadavky. Kromě toho je správné uchopení nastavení systému optické dráhy osvětlení nezbytným krokem po výměně žárovky v procesu používání mikroskopu a je také nezbytným prostředkem pro občasné testování výkonu mikroskopu v proces každodenního používání. Nastavení systému optické dráhy osvětlení mikroskopu zahrnuje především následující 4 položky: 1. Předběžné nastavení komory lampy zdroje světla mimo mikroskop ① Nejprve otevřete plášť komory lampy a zatlačte halogenovou žárovku do objímky. pružinová spona. Nečistoty, jako jsou otisky prstů zanechané na žárovce, ovlivní životnost žárovky. ②Postavte místnost s lampou na stůl, po zapnutí napájení pomocí speciálního šroubováku upravte otvor pro zaostřovací knoflík lampy (označený „←→“) tak, aby se vlákno promítalo na zeď 1-2 m daleko a obraz vlákna je upraven. Poté upravte výšku žárovky, abyste upravili otvor pro vlákno (označený „──“), aby byla poloha vlákna vhodná; poté seřiďte levý a pravý otvor pro šrouby pro nastavení polohy žárovky (označené „──“) tak, aby byla levá a pravá poloha vlákna vhodná.
2. Účelem kontroly a korekce polohy iluminátoru světelného zdroje (vlákna) v mikroskopu je upravit obrazový konec iluminátoru do zorného pole čočky objektivu a zajistit, aby zorné pole mikroskopu je plně a rovnoměrně přijímán z perspektivy světelného zdroje. Osvětlení, které je předpokladem pro seřízení osvětlovací soustavy Kühler. Potřebné základní nástroje: Centrovací dalekohledy jsou vybaveny zakoupením mikroskopu. ① Odpojte pouzdro z matného skla v krytu lampy a vložte kryt lampy zpět na mikroskop ② Vyberte čočku objektivu 10×, zapněte program světelného zdroje, abyste našli vzorek a jasně zaostřili, a poté použijte objektiv 40× čočka pro jasné zaostření vzorku (40× čočka objektivu Celý obraz vlákna je jasně vidět); ③ Otevřete aperturní clonu i polní clonu kondenzoru na maximum; ④ Odpojte jeden z okulárů, nahraďte jej centrovacím dalekohledem, uchopte bílou část a druhou rukou roztáhněte černý okulár. Obraz vlákna je vidět v zorném poli; ⑤Pokud poloha vlákna není vhodná, upravte otvor „──“, upravte obraz vlákna ve vodorovném směru, upravte otvor „──“ a upravte obraz vlákna ve svislém směru, dokud neupravte obraz vlákna na kruhový obraz, který právě vyplňuje otvor objektivu; ⑥ Po nastavení vložte pouzdro z matného skla zpět do jeho původní polohy, odpojte centrovací dalekohled a vyměňte okulár pro další nastavení. Výše uvedené nastavení osvětlovací místnosti s lampou zdroje světla vně mikroskopu a kalibraci polohy osvětlovače zdroje světla uvnitř mikroskopu je nutné provést pouze při první instalaci a odladění mikroskopu a při prvním použití baňky. nahrazeno. V případě nejasností jej můžete vrátit do původního stavu dle výše uvedených kroků.
3. Správné nastavení systému osvětlení Kohler (Kohler) Správné nastavení mikroskopu, jedním z hlavních úkolů je nastavení systému světelné dráhy osvětlení a klíčové je nastavení systému osvětlení Kohler. Každý, kdo používá mikroskopy, zejména ti, kdo pořizují mikrosnímky, by měl mít určité pochopení a zvládnutí principů osvětlovacího systému Kühler a jeho kroků nastavení, aby mohl plně využít funkce mikroskopu. Výsledné fotografie mohou být konzistentnější a efektně dokonalejší. Princip Kühlerova osvětlovacího systému je jednoduchý: světlo vyzařované kterýmkoli bodem na iluminátoru světelného zdroje může osvětlit zorné pole mikroskopu a světlo vyzařované každým bodem na iluminátoru světelného zdroje se shromažďuje a je v zorné pole mikroskopu. Je dosaženo velmi dostatečného a rovnoměrného osvětlení. Účelem seřízení osvětlovacího systému Kuhler je získat rovnoměrné a dostatečné osvětlení pro pozorované zorné pole a zabránit tomu, aby rozptylové světlo ovlivňovalo nebo rušilo zobrazovací systém, aby se zabránilo tvorbě mlhy na negativu při fotografování. Základní součásti vysoce nastavitelného osvětlovacího systému Kühler: polní clona, kondenzorový systém s nastavením na ose. ① Vyberte 10× čočku objektivu a 10× okulár ② Vložte přední čočku kondenzoru do optické dráhy, nastavte aperturní clonu do střední polohy (ne příliš velkou nebo ne příliš malou) a poté zvedněte kondenzor do horní polohy a nastavte otočný talíř kondenzoru do polohy Jasné pole "J" ③ Nastavte clonu pole na minimum (0,1)
④ Umístěte uzavřený biologický vzorek na stolek, zapněte zdroj světla a zřetelně zaostřete
⑤ V zorném poli se objeví lokálně osvětlená oblast nebo světlý bod, což je rozmazaný obraz clony pole, ve kterém jsou jasně vidět detaily vzorku; Podívejte se na podrobnosti vzorku jasně
⑥ Mírně spusťte kondenzor, aby se světlý bod v zorném poli postupně zužoval a postupně se stal jasným polygonálním obrazem, což je jasný obraz clony pole;
⑦ Za normálních okolností není polygonální obraz ve středu zorného pole. Pro nastavení polygonálního obrazu zorného pole do středové polohy je nutné seřídit dvojici centrovacích šroubů kondenzoru;
⑧ Postupně otevírejte clonu zorného pole, aby se polygonální obraz stal vepsaným polygonem zorného pole, a dále zkontrolujte stav zarovnání. Pokud vyrovnání není ideální, pokračujte v mírném seřizování vyrovnávacího šroubu;
⑨ Lehce otevřete clonu pole, aby polygonální obraz zmizel na okraji zorného pole. V tomto okamžiku je úprava osvětlovací soustavy Kühler dokončena. Po úpravě osvětlovacího systému Kühler bylo celé zorné pole osvětleno rovnoměrně a mikrofotografie byly jasné a jasné s normálním kontrastem.
