Použití fluorescenční mikroskopie: Techniky a dovednosti
Technické parametry fluorescenčního mikroskopu 1. Širokoúhlý okulár 2. Achromatická čočka objektivu 3. Konvertor objektivu se čtyřmi otvory 4. Epifluorescenční zařízení Modrá (B) Zelená (G) excitační systém 100W rtuťová výbojka 5. Mechanismus koaxiálního hrubého a jemného nastavení zaostření: nastavení Rozsah zaostření: 15 mm Hodnota mřížky mikropohybu: 0,002 mm 6. Dvouvrstvý mechanický stůl Rozsah podélného pohybu: 70 mm Rozsah bočního pohybu: 50 mm
Použijte dovednostní metodu
(1) Podložní sklíčko
Tloušťka podložního skla by měla být mezi 0,8 a 1,2 mm. Příliš silné sklíčko jednak pohltí více světla a jednak se excitační světlo nemůže soustředit na preparát. Sklíčka musí být hladká, stejnoměrná v tloušťce a bez zjevné autofluorescence. Někdy se používají sklíčka z křemenného skla.
(2) Krycí sklo
Tloušťka krycího skla je asi 0,17 mm, hladké. Pro posílení excitačního světla lze použít i interferenční krycí sklo, což je speciální krycí sklo potažené několika vrstvami látek (např. fluorid hořečnatý), které mají různé interferenční účinky na světlo různých vlnových délek, což může způsobit fluorescence probíhá hladce. Vzrušující světlo prochází skrz a odráží se a toto odražené excitační světlo excituje vzorek.
(3) Vzorek
Plátky tkáně nebo jiné vzorky by neměly být příliš silné. Pokud je příliš silný, většina excitačního světla se spotřebuje ve spodní části preparátu, zatímco horní část přímo pozorovaná čočkou objektivu nebude plně vybuzena. Kromě toho úsudek ovlivňuje překrývání buněk nebo kryt nečistot.
(4) Montážní prostředek
Glycerin se běžně používá jako montážní činidlo, které nesmí mít žádnou autofluorescenci, je bezbarvé a průhledné a jas fluorescence je jasnější při pH 8.5-9.5 a není snadné rychle vyblednout. Proto se jako montážní činidlo běžně používá stejná směs glycerolu a 0,5mol/l roztoku uhličitanového pufru s pH 9.{6}} až 9,5.
(5) zrcadlový olej
Obecně platí, že při pozorování vzorků pomocí fluorescenčních mikroskopů s tmavým polem a čoček s olejovou imerzí je nutné použít imerzní olej. Nejlepší je použít speciální nefluorescenční imerzní olej. Místo něj lze také použít výše uvedený glycerin a lze také použít tekutý parafín, ale index lomu je nízký, což má mírný dopad na kvalitu obrazu. Vliv.
