Speciální struktura fluorescenčního mikroskopu zahrnuje:
(I) Systém barevných filtrů
Barevný filtr je důležitou součástí fluorescenčního mikroskopu, jeho jádro tvoří filtr excitačního světla (první bariérový filtr), emisní světelný filtr (druhý bariérový filtr) a složení napůl průhledné a napůl protifiltrové (zrcadlo dělící paprsek). . Různí výrobci modelů barevných filtrů, název často není jednotný.
1. Filtr excitačního světla a filtr emisního světla: podle zdroje světla a charakteristik fluorochromu obvykle zvolte následující tři typy přizpůsobení, abyste zajistili určitý rozsah vlnových délek excitačního světla a provedli excitaci fluorescence přes okuláru k zobrazování.
UV excitace: Filtr excitačního světla umožňuje prostup UV světla a blokuje průchod viditelného světla nad 400nm. Odpovídající emisní filtr umožňuje průchod modrého světla, které se v zorném poli jeví jako modré, např. pro barvení DAPI.
Excitace modrým světlem: Filtr excitačního světla umožňuje průchod modrého světla a blokuje ostatní vlnové délky světla. Odpovídající emisní filtr umožňuje průchod zeleného světla, např. pro markery barvení GFP.
Zelené buzení: Excitační filtr umožňuje průchod zeleného světla a blokuje ostatní vlnové délky. Odpovídající emisní filtr obvykle umožňuje průchod červeného světla, např. barvení rodaminem.
2. Poloprůhledný a poloodrazný filtr: jeho úlohou je zcela blokovat buzení světla odrazem; a přes odpovídající rozsah vlnových délek emitovaného světla. Jeho model a buzení světelných filtrů a emise světelných filtrů tomu odpovídají.
(B) čočka objektivu a okulár
Lze použít různé objektivy, ale * dobrá volba symetrického, achromatického objektivu, protože jeho autofluorescence je velmi malá a vlastnosti prostupu světla (rozsah vlnových délek) vhodné pro fluorescenci. Protože fluorescenční jas obrazu v zorném poli mikroskopu je úměrný druhé mocnině úsťové frekvence objektivu a nepřímo úměrný jeho zvětšení, tak za účelem zlepšení jasu fluorescenčního obrazu by měl objektiv s velkou úsťovou frekvencí být použit. Speciálně pro fluorescenci není dostatečně silný preparát, měl by se používat velký objektiv s vysokou propustností světla, s co nejnižším okulárem.
C) jiná optická zařízení
Reflektor, jeho reflexní vrstva je obecně pokovená hliníkem, protože hliník na ultrafialovém a viditelném světle absorbuje modrofialovou oblast méně, odráží až 90% nebo více (zatímco odrazivost stříbra je pouze 70%). Obecně se používají ploché reflektory. Bodové zrcadlo, navržené a vyrobené speciálně pro fluorescenční mikroskopické reflektorové zrcadlo vyrobené z křemenného skla nebo jiného UV průhledného skla. Zařízení pro dopadající světlo, které je kromě funkce zdroje procházejícího světla vhodnější pro neprůhledné a průsvitné vzorky, jako je tlustý film, filtrační membrána, kolonie, tkáňové kultury a další vzorky pro přímé pozorování. V posledních letech došlo k vývoji nového typu fluorescenčního mikroskopu využívajícího zařízení s padajícím světlem, tzv. padající fluorescenční mikroskop.
(D) světelný zdroj
V dnešní době se jako zdroj světla používá 50 nebo 100W vysokotlaká rtuťová výbojka. Působením výboje dvou elektrod, způsobeným vypařováním rtuti, koule tlaku vzduchu rychle stoupá (tento proces obvykle trvá asi 5 ~ 15 minut) a v procesu emise světelných kvant je vlnová délka uvolněného světla dostatečná k excitaci. všechny typy fluorescenčních látek, proto se pro fluorescenční mikroskopii běžně používá.
Rtuťové výbojky mají relativně krátkou životnost, obvykle 200 hodin, a v reakci na toto omezení životnosti byl v posledních letech široce používán nový zářivkový světelný zdroj X-Cite pro svou dlouhou životnost lampy 2000 hodin a flexibilní použití. - nevyžaduje předehřívání a je připraven k použití ihned po vybalení z krabice.
