Role každého filtru ve fluorescenční mikroskopii
Nejzásadnějším problémem fluorescenční mikroskopie je kombinace filtrů, přičemž jak excitační filtr, tak stínící filtr musí být vhodné pro pozorované fluorescenční těleso a vzájemně se sladit. Pro určité specifické účely, pokud dojde k chybě při výběru filtru, může to vést k nedorozuměním a dokonce k nesprávným výsledkům. Výdobytky fluorescenční mikroskopie a použití vysoce kvalitních filtrů a důmyslných filtračních skupin k sobě neodmyslitelně patří. Existuje několik typů filtrů pro fluorescenční mikroskopii.
1. Filtr pohlcující teplo
Filtr absorbující teplo je nezbytným filtrem, aby se zabránilo poškození skupiny optických zařízení tepelnému záření ve spektru světelného zdroje. Rané pokročilé mikroskopy byly vybaveny lahvemi ve tvaru bubnu, které mohly obsahovat destilovanou vodu jako zařízení pohlcující teplo. Moderní výzkumné mikroskopy ve velkém měřítku jsou vybaveny skleněnými filtry absorbujícími teplo ve světelných boxech nebo komorách světelných zdrojů, což jsou průhledné, slabě žluté skleněné tabule. Filtry Leitz KG1 (2 mm) a BG38 (4 mm) dokážou propustit téměř všechna spektra ultrafialového a viditelného světla, díky čemuž jsou filtry se světelným tokem až 98 %. Pouze selektivně absorbuje čáry infračerveného fototermálního záření.
2. Budicí filtr
Excitační filtry mohou selektivně absorbovat spektrální čáry o dlouhých vlnových délkách a propouštět pouze ultrafialové světlo. Filtry pro fialové, modré a zelené světlo jsou excitační filtry. Zeiss, Reichert, Olympus B-series, G-series, BG series, Shott UG series, Opton H, G, BP series, Leitz BP series a další jsou všechny budicí filtry.
3. Blokovací filtr
Blokovací filtr je filtr, který selektivně absorbuje krátkovlnné spektrální čáry a infračervené záření, což umožňuje pozorovateli vidět fluorescenci vyzařovanou testovaným objektem a zároveň chrání rohovku před poškozením UV zářením.
4. Filtr pro separaci barevného světla
Filtr pro separaci barevného světla je filtr, který odráží excitační světlo na testovaný objekt, způsobí, že objekt emituje fluorescenci, a poté fluorescenci přenáší do okuláru. Tento typ filtru lze použít pouze v koncentrátorech dopadajícího paprsku, zatímco transmisní světelná fluorescenční mikroskopie nevyžaduje separaci barev.
5. Interferenční filtr
Interferenční filtr je typ vysoce výkonného budícího filtru. Jedná se o filtr vyrobený naskládáním několika tenkých kovových filmů mezi dvě leštěné skleněné tabule. Index lomu každého tenkého kovového filmu je jiný, takže spektrální čáry různých vlnových délek osvětlovacího světelného zdroje se opakovaně odrážejí na každém kovovém filmu, což způsobuje, že některé vlnové délky spektrálních čar se v důsledku destruktivní interference vyruší, zatímco jiné jsou zesíleny aditivní interference a přenášeny přes. Výsledkem je filtr s úzkým přenosovým spektrem, poloviční šířkou píku pouze 6~20nm a propustností 60%~70%.
