Rozdíl mezi fluorescenční a laserovou konfokální mikroskopií
fluorescenční mikroskop
1. Fluorescenční mikroskop je zařízení, které využívá ultrafialové světlo jako zdroj světla k osvětlení testovaného předmětu, který způsobí, že emituje fluorescenci, a poté pod mikroskopem pozoruje tvar a polohu předmětu. Fluorescenční mikroskopie se používá ke studiu absorpce, transportu, distribuce a lokalizace látek v buňkách. Některé látky v buňkách, jako je chlorofyl, mohou po vystavení ultrafialovému záření emitovat fluorescenci; Některé látky samy o sobě nemusí emitovat fluorescenci, ale pokud jsou obarveny fluorescenčními barvivy nebo fluorescenčními protilátkami, mohou také emitovat fluorescenci pod ultrafialovým zářením. Fluorescenční mikroskopie je jedním z nástrojů kvalitativního a kvantitativního výzkumu těchto látek.
2. Princip fluorescenčního mikroskopu:
(A) Světelný zdroj: Světelný zdroj vyzařuje světlo různých vlnových délek (od ultrafialového po infračervené).
(B) Světelný zdroj s excitačním filtrem: Propouští světlo specifické vlnové délky, které může ve vzorku vyvolat fluorescenci, zatímco blokuje světlo, které je pro excitační fluorescenci nepoužitelné.
(C) Fluorescenční vzorky: obecně obarvené fluorescenčními pigmenty.
(D) Blokovací filtr: selektivně propouští fluorescenci blokováním excitačního světla, které nebylo absorbováno vzorkem, a některé vlnové délky jsou také selektivně přenášeny ve fluorescenci. Mikroskop, který využívá ultrafialové světlo jako zdroj světla k vyzařování fluorescence z ozařovaného předmětu. Elektronový mikroskop poprvé sestavili Knorr a Harroska v Berlíně v Německu v roce 1931. Tento typ mikroskopu používá vysokorychlostní elektronový paprsek místo paprsku světla. Vzhledem k mnohem kratší vlnové délce toku elektronů ve srovnání se světelnými vlnami může zvětšení elektronového mikroskopu dosáhnout 800000krát, s minimálním limitem rozlišení 0,2 nanometrů. Rastrovací elektronový mikroskop, který se začal používat v roce 1963, umožňuje lidem vidět drobné struktury na povrchu předmětů.
3. Rozsah aplikace: Používá se ke zvětšení obrázků malých objektů. Obecně se používá pro pozorování biologie, medicíny, mikroskopických částic atd.
konfokální mikroskop
1. Konfokální mikroskop přidává k dráze odraženého světla semireflexní čočku, která ohýbá odražené světlo, které již čočkou prošlo, do jiných směrů. V ohnisku je přepážka s dírkou a malá dírka se nachází v ohnisku. Za ozvučnicí je trubice fotonásobiče. Lze si představit, že odražené světlo před a za ohniskem detekčního světla nemůže být zaostřeno na malý otvor skrz tento konfokální systém a bude blokováno přepážkou. Fotometr tedy měří intenzitu odraženého světla v ohnisku.
2. Princip: Tradiční optické mikroskopy používají polní světelné zdroje a obraz každého bodu na preparátu bude ovlivněn difrakcí nebo rozptýleným světlem ze sousedních bodů; Laserový skenovací konfokální mikroskop využívá laserový paprsek k vytvoření bodového světelného zdroje skrz osvětlenou dírku pro skenování každého bodu v ohniskové rovině vzorku. Osvětlený bod na vzorku je zobrazen v detekční dírce a je přijímán bod po bodu nebo linii trubicí fotonásobiče (PMT) nebo termoelektrickým spojovacím zařízením (cCCD) po detekční dírce, čímž se rychle vytvoří fluorescenční obraz na monitoru počítače. obrazovka. Osvětlovací dírka a detekční dírka jsou konjugovány vzhledem k ohniskové rovině čočky objektivu. Body v ohniskové rovině jsou současně zaostřeny na osvětlovací dírku a emisní dírku a body mimo ohniskovou rovinu nebudou v detekční dírce zobrazeny. To má za následek konfokální obraz, který představuje optický průřez vzorku, překonávající nevýhodu rozmazaných obrazů v konvenční mikroskopii.
3. Oblasti použití: zahrnující medicínu, výzkum zvířat a rostlin, biochemii, bakteriologii, buněčnou biologii, tkáň a embryo, potravinářství, genetiku, farmakologii, fyziologii, optiku, patologii, botaniku, neurovědu, mořská biologie, nauku o materiálech, elektronickou vědu, mechanika, ropná geologie a mineralogie.
