Struktura a hlavní součásti fluorescenčního mikroskopu
Fluorescenční mikroskopie je základním nástrojem v imunofluorescenční cytochemii. Skládá se z hlavních komponent, jako je zdroj světla, systém filtračních desek a optický systém. Jedná se o použití určité vlnové délky světla k vybuzení vzorku, aby emitoval fluorescenci, a ke sledování fluorescenčního obrazu vzorku zesílením systému čočky objektivu a okuláru.
Struktura a hlavní součásti fluorescenčního mikroskopu
(1) Světelný zdroj
V dnešní době se jako světelné zdroje často používají 200W ultravysokotlaké rtuťové výbojky. Jsou vyrobeny z křemenného skla, uprostřed mají kulovitý tvar a uvnitř je naplněno určité množství rtuti. Při práci výboj mezi oběma elektrodami způsobuje odpařování rtuti a tlak vzduchu v kouli rychle stoupá. Když se rtuť zcela odpaří, může dosáhnout 50-70 standardního atmosférického tlaku a tento proces obecně trvá asi 5-15 minut. Luminiscence ultravysokotlaké rtuťové výbojky je výsledkem emise světelných kvant během kontinuální disociace a redukce molekul rtuti výbojem mezi elektrodami. Vyzařuje silné ultrafialové a modrofialové světlo, které stačí k excitaci různých fluorescenčních látek, proto má široké využití ve fluorescenční mikroskopii.
Ultravysokotlaké rtuťové výbojky také vydávají hodně tepla. Proto musí mít lampový dům dobré podmínky pro odvod tepla a teplota pracovního prostředí by neměla být příliš vysoká.
Novou ultra vysokotlakou rtuťovou výbojku lze na začátku používání zapálit bez vysokého napětí. Po určité době používání je potřeba jej spustit na vysoké napětí (asi 15000V). Po spuštění je pracovní napětí pro údržbu obecně 50-60V a pracovní proud je asi 4A. Průměrná životnost 200W ultra vysokotlaké rtuťové výbojky je asi 200 hodin, pokud je používána pokaždé 2 hodiny. Čím kratší je pracovní doba, tím kratší je životnost. Pokud je používán pouze 20 minut, životnost se sníží o 50 procent. Při jeho používání proto minimalizujte počet startů. Během používání žárovky se její světelný výkon postupně snižuje. Poté, co kontrolka zhasne, počkejte, až vychladne, než znovu spustíte. Nevypínejte žárovku ihned po jejím zapálení, aby nedošlo k poškození elektrody v důsledku neúplného odpaření rtuti. Obecně je třeba počkat 15 minut. Kvůli vysokému tlaku ultravysokotlaké rtuťové výbojky a silným ultrafialovým paprskům musí být žárovka umístěna v komoře lampy před jejím zapálením, aby nedošlo k poškození očí a nezpůsobení provozu v případě výbuchu .
Obvod ultra vysokotlaké rtuťové výbojky (100W nebo 200W) světelného zdroje a několika částí včetně transformátoru, předřadníku a startéru. V komoře lampy je systém pro nastavení světelného středu žárovky. Za žárovkou žárovky je instalován pohliníkovaný konkávní reflektor a v přední části je instalována čočka pro sběr světla.
Domácí ultravysokotlaká rtuťová výbojka GCQ-200 má dobrý výkon a může nahradit dovážené žárovky, jako je HBO-200. Průměrná životnost je více než 200h a cena je relativně nízká.
Jednoduché a přenosné zařízení se světelným zdrojem na bázi bromu a wolframu s vysokou barevnou teplotou vyvinuté v mé zemi má malé rozměry, nízkou hmotnost, nízkou spotřebu, dvojí použití střídavého a stejnosměrného proudu (se stejnosměrným napájením), snadno se přenáší, snadno se používá a má byl popularizován a aplikován.
(2) Systém barevných filtrů
Systém barevných filtrů je důležitou součástí fluorescenčního mikroskopu, který se skládá z excitační filtrační desky a lisovací filtrační desky. Model filtrační desky a název každého výrobce často nejsou jednotné. Filtrační desky jsou obecně pojmenovány podle základní barvy, písmena vpředu představují barvu, písmena vzadu představují sklo a čísla představují vlastnosti modelu. mikroskop olympus
(3) Objektiv
Lze použít různé objektivy, ale používají se achromatické objektivy, protože jejich autofluorescence je minimální a jejich vlastnosti prostupu světla (rozsah vlnových délek) jsou vhodné pro fluorescenci. Vzhledem k tomu, že fluorescenční jas obrazu v zorném poli mikroskopu je úměrný druhé mocnině poměru apertur čočky objektivu a nepřímo úměrný jejímu zvětšení, je za účelem zlepšení jasu fluorescenčního obrazu použita čočka objektivu s velkým měl by se použít poměr clony. Zejména při velkém zvětšení je jeho účinek velmi zřejmý. Proto by se u preparátů s nedostatečnou fluorescencí měla používat čočka objektivu s velkým aperturním poměrem s co nejnižším okulárem (4×, 5×, 6,3× atd.).
(4) Zrcadlo
Reflexní vrstva reflektoru je obecně pokovená hliníkem, protože hliník absorbuje méně v modrofialové oblasti ultrafialového světla a viditelného světla a odraz je více než 90 procent, zatímco odraz stříbra je pouze 70 procent. Obecně se používá plochý reflektor.
(5) Kondenzátor
Kondenzátory určené pro fluorescenční mikroskopii jsou vyrobeny z křemenného skla nebo jiného UV-transparentního skla. Existují dva typy kondenzorů s čistým polem a kondenzátory s tmavým polem. Existují také koncentrátory fluorescence fázového kontrastu.
(6) Zařízení Epi-light
Nový typ epi-světelného zařízení spočívá v tom, že po dopadu světla ze světelného zdroje na interferenční spektroskopický filtr se díky vlastnostem povlaku na filtru odrazí část s krátkou vlnovou délkou (ultrafialová a fialově modrá). Když je filtr otočen ke zdroji světla, je úhel 45. Když je nakloněn, střílí na čočku objektivu vertikálně a přes čočku objektivu střílí na preparát, takže je vzorek excitován. V tomto okamžiku čočka objektivu přímo funguje jako sběrač světla. Zároveň je dlouhá část filtru (zelená, žlutá, červená atd.) pro filtr průhledná, takže se neodráží ve směru čočky objektivu a filtr funguje jako excitační filtrační deska, protože fluorescence vzorku je v dlouhovlnné oblasti viditelného světla, může procházet filtrem a dostat se do okuláru pro pozorování, jas fluorescenčního obrazu se zvyšuje s rostoucím zvětšením a je silnější než procházející světlo zdroj při velkém zvětšení. Kromě funkce transmisního zdroje světla je vhodnější pro přímé pozorování neprůhledných a průsvitných vzorků, jako jsou silné plátky, filtrační membrány, kolonie a vzorky tkáňových kultur. Nové fluorescenční mikroskopy vyvinuté v posledních letech většinou využívají epi-světelná zařízení, která se nazývají epifluorescenční mikroskopy.
