Použití stereo fluorescenčního mikroskopu a bezpečnostní opatření
Instrukce:
(1) Umístěte materiálový list na stolek.
(2) Zapněte stabilizátor napětí fluorescenčního mikroskopu. Poté stisknutím spouštěcí skupiny zapněte UV lampu a nevypínejte ji do 15 minut a znovu ji nespouštějte do 3 minut po jejím vypnutí.
(3) Přepněte excitační filtr na v, filtr pro separaci barev na v a vyberte blokovací filtr 495 nebo 475 nm.
(4) Pro mikroskopické vyšetření zvolte fluorescenční objektivový mikroskop uvFL40, uvFL100.
(5) Na podložní sklíčko přidejte nefluorescenční olej, nejprve použijte 40x a poté pro kontrolu použijte 100x zaostřovací mikroskop. Objeví se fluorescence.
(7) Protože fluorescence fluorescenčních látek postupně s časem slábne, když jsou ozařovány ultrafialovým světlem, mělo by se zorné pole při mikroskopickém zkoumání často měnit.
(8) Mikroskopy uvFL10 nebo uvFL20 s malým zvětšením lze také použít ke kontrole materiálů (při použití čoček s nízkou spotřebou se nepřidává fluorescenční olej).
Způsob záznamu fluorescenčního obrazu:
Fluorescenční obraz viděný fluorescenčním mikroskopem má jak morfologické charakteristiky, tak fluorescenční barvu a jas. Při posuzování výsledků je třeba tyto dva spojit pro komplexní posouzení. Výsledky jsou zaznamenávány na základě subjektivních ukazatelů, tedy vizuálního pozorování pracovníky. Jako obecné kvalitativní pozorování v zásadě spolehlivé. S rozvojem technologie a vědy se k zaznamenání výsledků úsudku v různé míře používají objektivní indikátory, jako jsou buněčné spektrofotometry, analyzátory obrazu a další přístroje. Výsledky zaznamenané těmito nástroji však musí být také kombinovány se subjektivními úsudky.
Fotografování fluorescenčním mikroskopem je velmi potřebné pro záznam fluorescenčních snímků. Protože fluorescence snadno slábne a slábne, je nutné zaznamenávat výsledky v reálném čase. Metoda je v podstatě stejná jako u běžné mikrofotografie. Stačí použít vysokorychlostní fotosenzitivní film, jako je ASA200 nebo vyšší nebo 24. výše. Protože ultrafialové světlo má silný vliv na zhášení fluorescence, jako jsou markery FITC, jas fluorescence se při ozařování ultrafialovým světlem po dobu 30 sekund sníží o 50 procent. Pokud je tedy rychlost expozice příliš nízká, fluorescenční snímek nelze pořídit. Všeobecné výzkumné fluorescenční mikroskopy mají poloautomatická nebo plně automatická fotomikrografická systémová zařízení.
Opatření:
(1) Pracujte přísně v souladu s požadavky továrních pokynů fluorescenčního mikroskopu a neměňte program libovolně.
(2) Kontrola by měla být prováděna v temné místnosti. Po vstupu do temné komory připojte zdroj napájení a zapalte ultra vysokotlakou rtuťovou výbojku po dobu 5-15 minut. Poté, co se silné světlo ze světelného zdroje ustálí, oči se zcela přizpůsobí temné komoře a poté začnou pozorovat preparát.
(3) Aby se zabránilo poškození očí ultrafialovými paprsky, měli byste při nastavování zdroje světla nosit ochranné brýle.
(4) Doba kontroly je vždy nejlépe 1-2 hodin. Pokud překročí 90 minut, intenzita svítivosti ultravysokotlaké rtuťové výbojky se postupně sníží a fluorescence slábne; po ozáření vzorku ultrafialovými paprsky po dobu 3-5 minut bude fluorescence rovněž výrazně oslabena; proto by to nemělo přesáhnout maximálně 2-2 hodin. 3h.
(5) Životnost světelného zdroje fluorescenčního mikroskopu je omezená a vzorky by měly být kontrolovány společně, aby se ušetřil čas a ochránil světelný zdroj. Když je horké počasí, měly by být přidány ventilátory, které odvádějí teplo, a nové žárovky by se měly zaznamenávat od začátku doby jejich používání. Chcete-li ji po zhasnutí lampy znovu použít, musíte před zapálením počkat, dokud žárovka dostatečně nevychladne. Vyhněte se osvětlení zdroje světla několikrát denně.
(6) Pozorujte vzorek ihned po obarvení, protože fluorescence bude časem postupně slábnout. Pokud je vzorek skladován v polyetylenovém plastovém sáčku při 4 stupních, doba zeslabení fluorescence může být zpožděna a montážní činidlo může být zabráněno odpařování.
(7) Hodnotící standard jasu fluorescence: obecně se dělí do čtyř úrovní, to znamená „jedna“ – není vidět žádná nebo slabá fluorescence. " plus "— Je vidět pouze jasně viditelná fluorescence. "plus plus" — Viditelné a jasné
