Výhody a nevýhody multifotonové laserové skenovací mikroskopie
Multi-Photon Laser Scanning Microscopy je experimentální metoda založená na technologii laserové skenovací mikroskopie, která poskytuje přesnější možnosti optického řezu ve 3D zobrazení. Metoda multifotonové fluorescenční excitace využívá dlouhé vlnové délky červeného nebo blízkého infračerveného světla k získání fluorescenčních obrazů vzorků s vysokým rozlišením s minimálním zabíjením aktivních vzorků, díky čemuž je vhodná pro zobrazování živých buněk, zejména tlustých živých tkání, jako jsou mozkové řezy, embrya, celé orgány a dokonce celé organismy.
Výhody jsou následující:
1, použití červeného světla nebo excitace infračerveného světla, rozptyl světla je malý (rozptyl malých částic a vlnová délka čtvrté mocniny obráceného poměru).
2, nevyžaduje dírku, může sbírat více rozptýlených fotonů ze zobrazovacího průřezu.
3, dírka nemůže rozlišit mezi rozptýlenými fotony emitovanými oblastí mimo zaostření nebo ohniskovou oblastí, multi-foton v poměru signálu k šumu hlubokého zobrazení je dobrý.
4, jednofotonová excitace ultrafialového nebo viditelného světla použitého v paprsku k dosažení ohniskové roviny před tím, než je vzorek snadno absorbován a zeslaben, není snadné hluboké buzení.
5, při pozorování biologickým mikroskopem, * prvním hlediskem je nepoškodit aktivní stav samotného organismu, zachovat koncentraci vody, iontů, cirkulaci kyslíku a živin. Při příležitostech světelného pozorování musí tepelná i fotonová energie zůstat v buňce bez poškození množstvím záření, světelné energie.
6, multi-fotonový mikroskop má také mnoho výhod. Jako je trojrozměrné rozlišení, hloubka vniknutí, účinnost rozptylu, světlo na pozadí, poměr signálu k šumu, ovládání atd., existují předchozí laserové mikroskopy, které nemají nebo mají nesrovnatelné mimo charakteristiky.
Vícefotonový konfokální laserový skenovací mikroskop byl rozšířen do různých oblastí výzkumu a aplikací. Je schopen trojrozměrného nedestruktivního pozorování vzorků v jejich přirozeném stavu a může zlepšit rozlišení a poměr signálu k šumu systému. Pomocí změny materiálových vlastností po vícefotonové excitaci lze také dosáhnout trojrozměrného ukládání výškových dat a trojrozměrné mikrovýroby v libovolném směru, což má vysokou aplikační hodnotu. Lze se domnívat, že s dalším vývojem strojů, materiálů, laserové technologie a dalších technologií souvisejících s multifotonovou konfokální mikroskopií bude vícefotonový konfokální laserový skenovací mikroskop větší rozvoj a širší uplatnění.
Nevýhody jsou následující:
1, pouze fluorescenční zobrazování.
2, pokud vzorek obsahuje chromofory, které mohou absorbovat excitační světlo, jako jsou pigmenty, může být vzorek tepelně poškozen.
3 je rozlišení mírně sníženo, i když jej lze zlepšit současným použitím konfokální clony, dojde však ke ztrátě signálu.
4. Náklady na multifotonovou rastrovací mikroskopii jsou vysoké kvůli omezení drahých ultrarychlých laserů.
