Metoda přímého počítání pomocí mikrobiálního mikroskopu
Experimentální kroky (metoda přímého počítání pomocí mikrobiálního mikroskopu)
1. Ředění
Suspenzi pivovarských kvasnic vhodně nařeďte. Pokud není bakteriální roztok koncentrovaný, není nutné jej ředit.
2. Mikroskopická vyšetřovací a počítací místnost
Před přidáním vzorků proveďte mikroskopické vyšetření počítací komory počítací desky. Pokud jsou nečistoty, je třeba je před počítáním vyčistit.
3. Přidejte vzorky
Zakryjte čistou a suchou destičku na počítání krvinek krycím sklem a poté použijte sterilní kapátko s jemnými ústy ke kapání malé kapky (ne příliš) zředěného roztoku kvasinek z okraje krycího skla. Nechejte bakteriální roztok vstoupit do počítací komůrky podél mezery kapilární permeací. Obecně může být počítací komora naplněna bakteriálním roztokem. Dávejte pozor, abyste nevytvářeli bubliny.
4. Mikroskopické počítání
Po 5 minutách odpočinku umístěte desku na počítání krvinek na stolek mikroskopu, nejprve pomocí mikroskopu s nízkým výkonem vyhledejte umístění počítací místnosti a poté přepněte na počítání na vysoce výkonný mikroskop. Pokud se před počítáním zjistí, že bakteriální roztok je příliš hustý nebo příliš řídký, je třeba před počítáním znovu upravit ředění. Obecným požadavkem na ředění vzorku je, že na malou buňku by mělo být přibližně 5-10 bakteriálních těl. Vyberte 5 buněk z každé počítací místnosti (volitelně 4 rohové a středové buňky) pro počítání. Mycelium umístěné na čáře mřížky obecně počítá pouze s horní a pravou čárou. Pokud kvasinky vyklíčí a velikost pupenu dosáhne poloviny mateřské buňky, odeberou se dva počty bakterií. Pro počítání vzorku je třeba vypočítat bakteriální obsah vzorku na základě hodnot získaných ze dvou počítacích komůrek.
5. Vyčistěte desku pro počítání krvinek
Po použití desku na počítání krvinek opláchněte vodním sloupcem na vodovodním kohoutku. K mytí nepoužívejte tvrdé předměty. Po umytí jej osušte na vzduchu samostatně nebo vyfoukejte fénem. Mikroskopické vyšetření, pozorujte, zda jsou v každé malé buňce zbytková bakteriální tělíska nebo jiné precipitáty. Pokud není čistý, musí se opakovaně umýt, dokud nebude čistý.
