Seznámení s výhodami a nevýhodami multifotonové laserové rastrovací mikroskopie
1. Při použití červeného světla nebo infračerveného světla k excitaci je rozptyl světla malý a rozptyl malých částic je nepřímo úměrný čtvrté mocnině vlnové délky.
2. Více rozptýlených fotonů ze zobrazovacího průřezu lze shromáždit bez potřeby dírek.
3. Dírka nedokáže rozlišit rozptýlené fotony emitované z rozostřené oblasti nebo oblasti zaostření a poměr signálu k šumu vícefotonového zobrazování v hlubokých vrstvách je dobrý.
4. Ultrafialové nebo viditelné světlo používané pro jednofotonovou excitaci je snadno absorbováno a zeslabeno vzorkem předtím, než paprsek dosáhne ohniskové roviny, a je obtížné excitovat hluboké vrstvy.
5. Z hlediska pozorování biologickým mikroskopem je na prvním místě nepoškodit aktivní stav samotného organismu a zachovat proudění vody, koncentraci iontů, kyslíku a živin. V případě pozorování světlem musí tepelná i fotonová energie zůstat v rozsahu ozáření a světelné energie, aby nedošlo k poškození buněk.
6. Multifotonová mikroskopie má mnoho výhod. Jako je trojrozměrné rozlišení, hloubková penetrace, účinnost rozptylu, pozadí světla, odstup signálu od šumu, ovládání atd., všechny mají vlastnosti, které předchozí laserové mikroskopy neměly nebo nemohly srovnávat.
Nevýhody multifotonové laserové skenovací mikroskopie:
1. Dokáže zobrazit pouze fluorescenci.
2. Pokud vzorek obsahuje chromofory, které absorbují excitační světlo, může být vzorek tepelně poškozen.
3. Rozlišení je mírně sníženo. I když to lze zlepšit současným použitím konfokálních otvorů, dochází ke ztrátě signálu.
4. Náklady na multifotonové rastrovací mikroskopy, omezené drahými ultrarychlými lasery, jsou relativně vysoké.
