Úvod do výhod a nevýhod multifotonových laserových rastrovacích mikroskopů
Výhody multifotonového laserového skenovacího mikroskopu:
1. Při buzení červeným nebo infračerveným světlem je rozptyl světla malý a rozptyl malých částic je nepřímo úměrný čtvrté mocnině vlnové délky.
2. Více rozptýlených fotonů ze zobrazovacího průřezu- lze shromáždit bez potřeby dírek.
3. Dírkové dírky nedokážou rozlišit rozptýlené fotony emitované z rozostřených nebo ohniskových oblastí a multifotony mají lepší poměr signálu -k-šumu při hlubokém zobrazování.
4. Ultrafialové nebo viditelné světlo použité pro excitaci jednoho fotonu je snadno absorbováno a zeslabeno vzorkem předtím, než paprsek dosáhne ohniskové roviny, což ztěžuje excitaci hlubokých vrstev.
5. Z hlediska pozorování biologickou mikroskopií je na prvním místě nepoškodit aktivní stav samotného organismu, zachovat cirkulaci vody, koncentraci iontů, kyslíku a živin. V oblasti pozorování světla musí tepelná i fotonová energie zůstat v rámci dávky ozáření a světelná energie, která nepoškozuje buňky.
6. Multifotonová mikroskopie má mnoho výhod. Pokud jde o trojrozměrné-rozlišení, hloubkovou invazi, účinnost rozptylu, světlo na pozadí, poměr signálu-k{4}}šumu, ovládání atd., existují vlastnosti, které předchozí laserové mikroskopy nemají nebo je nemohou překonat
Nevýhody multifotonového laserového skenovacího mikroskopu:
1. Pouze pro fluorescenční zobrazování.
2. Pokud vzorek obsahuje chromofory, které mohou absorbovat excitační světlo, může být vzorek vystaven tepelnému poškození.
3. Rozlišení je mírně sníženo, i když jej lze zlepšit současným použitím konfokálních malých otvorů, dochází ke ztrátě signálu.
4. Vzhledem k omezením drahých ultrarychlých laserů jsou náklady na multifotonové rastrovací mikroskopy relativně vysoké.
