Vylepšené výhody laserové skenovací multifotonové mikroskopie
Laserová skenovací multifotonová mikroskopie je hlavním vylepšením optické mikroskopie, hlavně pro pozorování hluboké struktury živých buněk, fixovaných buněk a tkání, a může získat jasné a ostré vícevrstvé struktury v rovině Z, tedy optické řezy, a může konstruovat Trojrozměrná pevná struktura vzorku. Konfokální mikroskop využívá zdroj laserového světla, který je rozšířen tak, aby vyplnil celou zadní ohniskovou rovinu čočky objektivu, a poté se sbíhá do velmi malého bodu v ohniskové rovině preparátu prostřednictvím čočkového systému čočky objektivu. V závislosti na numerické apertuře čočky objektivu je průměr nejjasnějšího bodu osvětlení asi 0,25 ~ 0,8 μm a hloubka asi 0,5 ~ 1,5 μm. Velikost konfokální skvrny závisí na konstrukci mikroskopu, vlnové délce laseru, vlastnostech čočky objektivu, stavovém nastavení snímací jednotky a povaze preparátu. Polní mikroskopy mají velký rozsah osvětlení a velkou hloubku osvětlení, zatímco konfokální mikroskopy mají osvětlení soustředěné do ohniska v ohniskové rovině. Nejzákladnější výhodou konfokální mikroskopie je, že může provádět jemné optické řezy silných fluorescenčních vzorků (až 50 μm nebo více), s tloušťkou asi 0,5 až 1,5 μm. Sérii obrazů optických řezů lze získat pohybem preparátu nahoru a dolů pomocí krokového motoru v ose Z mikroskopu. Získávání obrazových informací je řízeno v rovině a nebude rušeno signály z jiných míst na vzorku. Po odstranění efektu fluorescence pozadí a zvýšení poměru signálu k šumu se kontrast a rozlišení konfokálních snímků výrazně zlepšily ve srovnání s tradičními fluorescenčními snímky s osvětlením pole. V mnoha exemplářích je mnoho složitých konstrukčních komponent propleteno a tvoří složité systémy, ale jakmile se podaří shromáždit dostatek optických řezů, můžeme je rekonstruovat ve 3D pomocí softwaru. Tento experimentální přístup byl široce používán v biologickém výzkumu k objasnění komplexních strukturních a funkčních vztahů mezi buňkami nebo tkáněmi.
