Jak si vybrat mezi inverzním mikroskopem a fluorescenčním mikroskopem?
Mikroskop je důležitým nástrojem v buněčných kulturách a souvisejících experimentech s deriváty. V současné době jsou na trhu různé druhy mikroskopů a výběr mikroskopu, který odpovídá potřebám a je vhodný, je výzvou. Níže představíme principy inverzních mikroskopů a fluorescenčních mikroskopů, aby si vybral každý.
Inverzní mikroskop se stejně jako běžný mikroskop skládá hlavně ze tří částí: mechanické části, osvětlovací části a optické části. Složení inverzního mikroskopu je stejné jako složení běžného svislého mikroskopu, kromě toho, že čočka objektivu a osvětlovací systém jsou obrácené, první pod stolkem a druhý nad stolkem. Tato struktura výrazně rozšiřuje účinnou vzdálenost mezi osvětlovacím bodovým systémem a stolkem, což usnadňuje umístění silnějších pozorovacích nástrojů, jako jsou kultivační misky a lahvičky na buněčné kultury (samozřejmě lze použít i podložní sklíčka), přičemž pracovní vzdálenost mezi čočka objektivu a materiál nemusí být příliš velký. Inverzní mikroskop slouží lékařským a zdravotnickým institucím, univerzitám a výzkumným ústavům k pozorování mikroorganismů, buněk, bakterií, tkáňových kultur, suspenzí, sedimentů apod. Dokáže kontinuálně sledovat proces buněčné a bakteriální proliferace a dělení v kultivačním médiu a může zachytit jakoukoli formu tohoto procesu. Široce používán v oborech, jako je cytologie, parazitologie, onkologie, imunologie, genetické inženýrství, průmyslová mikrobiologie a botanika.
Fluorescenční mikroskopie se používá ke studiu absorpce, transportu, distribuce a lokalizace látek v buňkách. U testovaného objektu existují dva způsoby generování fluorescence: spontánní fluorescence, která je přímo emitována ultrafialovým zářením; Sekundární fluorescence nastává, když je pozorovaný objekt ošetřen fluorescenčními barvivy a vystaven ultrafialovému světlu před emitováním fluorescence. Některé látky v buňkách, jako je chlorofyl, produkují po vystavení ultrafialovému záření spontánní fluorescenci; Některé látky samy o sobě nemusí emitovat fluorescenci, ale pokud jsou obarveny fluorescenčními barvivy nebo fluorescenčními protilátkami, mohou také emitovat sekundární fluorescenci pod ultrafialovým zářením. Fluorescenční mikroskop používá bodový světelný zdroj s vysokou světelnou účinností k vyzařování určité vlnové délky světla (UV 365nm nebo UV modrá 420nm) přes systém barevného filtrování jako excitační světlo, které excituje fluorescenční látky ve vzorku, aby emitovaly různé barvy fluorescence. Poté je pozorován pomocí zvětšení čočky objektivu a okuláru. Tímto způsobem je i při slabé fluorescenci snadno rozpoznatelný a vysoce citlivý na silném kontrastním pozadí. Používá se hlavně pro studium buněčné struktury, funkce a chemického složení.
Fluorescenční mikroskopii lze rozdělit na dva typy: transmisní typ a padající typ. První je primitivnější, zatímco druhý je pokročilejší. Základní konstrukce obou typů fluorescenčních mikroskopů je podobná, hlavní rozdíl je v tom, že procházející excitační světlo prochází preparátem a vytváří fluorescenci jako celek. Fluorescence pak vstupuje do čočky objektivu a čím větší zvětšení, tím slabší fluorescence; Padající excitační světlo promítá na povrch preparátu a vytváří fluorescenci, která vstupuje do čočky objektivu. Čím větší zvětšení, tím silnější fluorescence, takže je vhodný pro pozorování s vysokým výkonem. Mezi hlavní součásti fluorescenčního mikroskopu patří světelný zdroj rtuťové výbojky, excitační filtrační deska, spektrofotometr (kapkový typ), supresní filtrační deska a kondenzátor tmavého pole (transmisní typ). Navíc, kvůli silnému zahřívání rtuťových výbojek, je většina z nich vybavena také filtry pohlcujícími teplo. Některé fluorescenční mikroskopy mají také objektiv s fázovým kontrastem a kruhovou aperturu, což umožňuje pozorování fázového kontrastu. Některé fluorescenční mikroskopy mají obrácenou strukturu, což je také inverzní mikroskop atd.
Kromě toho lze výše uvedené mikroskopy sestavit do digitálních mikroskopů instalací CCD, které převádí fyzické obrazy pozorované mikroskopem na digitální analogové obrazy a zobrazuje je v počítači. Výsledkem je, že můžeme posunout náš výzkum v mikropoli od tradičního binokulárního pozorování k reprodukci prostřednictvím displejů, a tím zlepšit efektivitu práce.
